文档介绍：第二军医大学硕士学位论文 NALP1基因与骨肉瘤生发、发展的相关性研究姓名:刘浩申请学位级别:硕士专业:外科学(骨外) 指导教师:纪方 201205 NALPl基因与骨肉瘤发生、发展的相关性研究摘要骨肉瘤是一种起源于间叶组织的恶性肿瘤,是少见的高度恶性肿瘤,转移早,预后差。骨肉瘤的发病原因目前仍然不清楚,目前手术和化疗是主要治疗手段。NALPl 是最近发现的一种重要的免疫分子,内含死亡结构域,其功能与参与炎性反应和细胞凋亡有关。在本次研究中,主要目的是研究NALPl基因在骨肉瘤细胞中的表达,及提高 NALPl基因的表达对骨肉瘤细胞的影响。实验分三部分,、ⅢA及蛋白表达的差异性。第二部分构建过表达NALPl基因的骨肉瘤细胞模型。第三部分检测过表达NALPl基因的骨肉瘤细胞与正常骨肉瘤细胞在体外迁移能力及体外凋亡两方面的比较分析。、】刚A及蛋白表达的差异性测定目的:测定NALPl基因在肿瘤细胞及正常成骨细胞中的mI矾A及蛋白的表达。方法:、, 利用RT-PCR及Wbstem免疫印迹法检测各细胞株中NALPl基因的mlⅢA及蛋白表达的差异。结果:、。结论:NALPl基因在肿瘤细胞中呈现低表达状态。第二部分过表达NALPl基因的骨肉瘤细胞的构建及鉴定目的:构建携带NALPlcDNA的真核表达质粒,、 ,使之能在肿瘤细胞中正常表达,为骨肉瘤的基因治疗研究奠定基础。方法: ,通过脂质体介导法转染骨肉瘤细胞MG-63、。利用ImPCR及w宅stem免疫印迹法检验目的基因mRNA及蛋白表达情况。结果:,RT-PCR及W_estem免疫印迹法检测证明重组质粒转染MG·63、。结论:,并成功转染了骨肉瘤细胞。得到了NALPl过表达的骨肉瘤细胞。第三部分过表达NALPl基因的骨肉瘤细胞的体外迁移及凋亡实验目的:、,对其体外迁移能力及对体外细胞凋亡的影响。方法:应用Tr锄swen实验方法,检测重组质粒转染的MG-63 细胞的迁移能力。应用流式细胞仪检测重组质粒转染的骨肉瘤细胞MG-63、U-20S 第二军医大学硕士学位论文的细胞凋亡率,并以空质粒转染的MG一63、、。结果:重组质粒转染后的MG一63细胞的迁移能力明显下降。重组质粒转染的骨肉瘤细胞MG一63、U-20S的早期细胞凋亡率明显高于对照组。结论:NALPl基因过表达能降低肿瘤细胞的迁移能力,而且能导致肿瘤细胞凋亡的增加,提高肿瘤细胞对化疗药物甲氨蝶呤的敏感性。关键词:骨肉瘤;NALPl基因;细胞凋亡;重组质粒;过表达·2- NALPl基因与骨肉瘤发生、发展的相关性研究 Abstract a is asortofhi曲1y maligIlantt啪ors origin ofmesenchymaltissue, K曲 incidenceofadolescence,hi曲rate ofe矾y metastaSis andpoor ,Ⅱ圮 causes of a is not cle盯锄d the main 仃eatment are surger)r a11d NALP is animponaIlt immune molecules recently discoVered,wmch containing ofgene NALP 1is inVolVedin位i11flanunato巧 response andapoptosis. IIlt11isresearch,t11e main pu印ose is t0study me expression ofgene NALP 1in a cells,孤d a cellsiIlwhich me expression ofgene NALP ,