文档介绍：-
. z.
质粒DNA的提取、纯化和电泳检测
**料，可以插入到DNA或RNA分子的碱基之间，并在300 nm波长的紫外光照射下放射出荧光，所以可用来显现凝胶中的核酸分子。在适当的染色条件下，荧光的强度是同DN***段的大小〔或数量〕成正比。
核酸在溶液中由于磷酸基而带负电荷，在电场中向正极移动。DNA在琼脂糖凝胶中的电泳迁移速率主要取决于下面六个因素：
〔1〕样品DNA分子的大小：电泳时，线性双螺旋DNA分子是以头尾位向前迁移的，其迁移速度与分子量〔所含碱基〕的对数值成反比，这是因为大分子有更大的摩擦阻力。
〔2〕DNA分子的构象：分子量一样而构象不同的DNA分子，其迁移速率不同。在抽提质粒DNA过程中，由于各种因素的影响，使超螺旋的共价闭合环状构造的质粒DNA〔cccDNA〕的一条链断裂，变成开环DNA〔ocDNA〕分子，如果两条链发生断裂，就转变为线状DNA〔Liner DNA〕分子。这三种构型的分子有不同的迁移率。一般情况下，超螺旋型〔cccDNA〕迁移速度最快，其次为线状分子，最慢的是开环状〔ocDNA〕分子。
〔3〕琼脂糖浓度：琼脂糖浓度直接影响凝胶的孔径，一定大小的DN***段在不同浓度的琼脂糖凝胶中的泳动速度不同。通常凝胶浓度愈低，则凝胶孔径愈大，DNA电泳迁移速度越快，即分子量越大，选用的凝胶浓度应越小。
〔4〕电泳所用电场：低电压条件下，线性DN***段的迁移速率与所用电压成正比。电压愈高带电颗粒泳动愈快，但随着电场强度增加，高分子量DNA的泳动速率以不同幅度增加，因此凝胶电泳别离DNA的有效*围随着电压上升而减小，为了获得DN***段的最正确别离效果，电场强度应小于5V/cm。
〔5〕电泳缓冲液: 在进展分子电泳时所使用的缓冲溶液，用以稳定体系酸碱度。常见的核酸电泳缓冲液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。电泳缓冲液的作用：①维持适宜的pH。电泳时，正极发生氧化反响〔4OH-+4e-→2H2O+O2〕，负极发生复原反响〔4H++4e-→2H2〕，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，使溶液两极的pH保持根本不变；②使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，～+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化；③电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，参加浓度为1～2mM，目的是螯合Mg2+等离子，防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。电泳缓冲液的组成和离子强度直接影响迁移率，当电泳液为无离子水〔如不慎在凝胶中忘记加缓冲液，即误用蒸馏水配置凝胶〕，溶液的导电性很少，带电颗粒泳动很慢，DNA几乎不移动；而在高离子强度下〔如错用10×电泳缓冲液〕，导电性极高，带电颗粒泳动很快，产生大量的热，有时甚至熔化凝胶或使DNA变性。
〔6〕温度：DNA在琼脂糖凝胶电泳中的行为受碱基组成和凝胶温度影响不明显。不同大小DN***段的相对电泳迁移率在4～30℃内无变化，一般琼脂糖凝胶电泳多在室温下进展