文档介绍：第一部分: 基本试验原理
基本原理
先将已知抗体或抗原结合在某种固相载体上，并保持其免疫活性，将待检标本和酶标抗原或抗体按不一样时骤与固相载体表面吸附抗体或抗原进行反应，用洗涤方法分离抗原抗体复合物和游离成份，然后加入 ELISA法更为惯用，其基本原理为，固相抗体+待测抗原+生物素化抗体+亲合素-酶标生物素复合物+底物显色。
研究生实验: 酶联免疫吸附实验
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: 人TNF-α检测试验原理
基本试验原理:
双抗体夹心ABC-ELISA法。抗人TNF-α单抗包被于酶标板上，标本和标准品中人TNF-α会与单抗结合，游离成份被洗去。同时加入生物素化抗人TNF-α抗体和辣根过氧化物酶标识亲合素。生物素与亲合素特异性结合；抗人TNF-α抗体与结合在单抗上人TNF-α结合而形成免疫复合物，游离成份被洗去。加入显色剂，若反应孔中有些人TNF-α，辣根过氧化物酶会使无色显色剂现蓝色，加终止液变黄。在450nm处测A值，人TNF-α浓度与A450值之间呈正比，可经过绘制标准曲线求出标本中人TNF-α浓度。
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: 试验试剂、材料和仪器设备
试验标本
试剂盒及其内容物
试验材料
仪器设备
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试验标本
人外周血(血清)
***试管
, 如有悬浮物应离心除去
, 高血脂
,按一次用量分装,冻存于-20℃,防止重复冻融
, 将标本作适当倍数稀释(提议做预试验, 以确定稀释倍数)
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试剂盒及其内容物
1a 标准品1支(4000pg，冻干)4℃
1b 标准品和标本稀释液(粉红色) 1瓶(15ml)4℃
2a 浓缩生物素化抗体2/1支*(60μl)4℃
2b 生物素化抗体稀释液（绿色）（15ml）4 ℃
3a 浓缩酶结合物2/1支*(60μl)4℃(避光)
3b 酶结合物稀释液(黄色)1瓶(15ml)4℃
4 浓缩洗涤液 20×(兰色)1瓶(15ml)4℃
5 显色剂1瓶(6ml)4℃
6 终止液1瓶(12ml)4℃
抗体包被板条8×12 或 8×6 4℃
封板胶纸1张
说明书1份 *:[96/48 Test]
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试验材料与设备
: -10ul, 2-20ul, 20-200ul, 200-1000ul
: 10ul, 200ul,1000ul
: 450nm
, 坐标纸等
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: 试验方法与步骤
1、提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，以平衡至室温。
2、将浓缩洗涤液（4）用双蒸水稀释(1:20)。未用完放回4℃。
3、标准品:以标准品/标本稀释液(1b)(1a), 静置15分钟后混匀，按说明稀释至所需浓度，再进行倍比稀释至所需浓度。未用完复溶标准品放入-20℃保留, 稀释标准品不应重复使用。
4、可依据实际情况，将标本做适当倍数稀释(可做预试验，以确定稀释倍数)。
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: 试验方法和步骤
5、从密封袋中取出所需板条，其它板条密封放回4℃
6、除空白孔外，分别将不一样浓度标准品/标本100ul/孔加入板条对应孔中，标准品和标本应作双复孔或三复孔。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵育90分钟。
7、洗板4次。
8、除空白孔外，加入1:100稀释生物素化抗体(2a)工作液 100ul/孔，封住板孔， 37℃孵育60分钟。
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: 试验方法和步骤
9、洗板4次。
10 、除空白孔外，加入1：100稀释酶结合工作液(100 ul/孔).封住板孔, 37℃孵育30分钟.
11 、洗板4次.
12、各孔加入显色剂100 ul/孔,避光37℃孵育10-20分钟。
13、各孔加入终止液100ul/孔,混匀后即刻测A450值(5分钟内)。
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