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大鼠乳鼠原代心房肌细胞培养的方法及鉴定·基础研究·淋刘志琴杨龙覃智芳胥亚楠【摘要】目的：介绍大鼠乳鼠心房肌细胞的分离、纯化，以及培养和鉴定方法。法：取銼笫笮姆孔橹．ヒ鹊鞍酌负．ア蛐徒涸赶姆考细胞收集在含％胎牛血清的培养基中，一般需消化�危�直到将组织块消化完全。将细胞悬液经��课蘧�恍飧滞��耍�艘�接种于细胞培养皿中，按差速贴壁分离法预接种。将细胞培养皿放置于�℃���号嘌�渲信嘌���螅�轿热〕鱿赴�嘌�螅��〕雠嘌�笾�的细胞悬液，将其稀释至���细胞／�，并加入��％��／��籅��Ｉ鲜鱿赴��航又钟�的细胞培养皿中，每孔��。�℃���号嘌��中培养，��蟾�灰淮闻嘌�海��蟾�菖嘌��颜色的变化，�～���灰淮闻嘌�骸���观察细胞每次消化后取半滴细胞液于培养皿上，于倒置显微镜下观察，可见细胞呈圆形或椭圆形，边缘有一圈光泽。细胞获得量第一次较少，第二次、第三次较多，第四次、第五次较少。刚接种时，细胞单个散在悬浮于培养液中，大多数细胞呈圆形或椭圆形，边缘区呈现光泽。接种��螅�杉�倭肯赴��壁。贴壁细胞有多种形态，以呈圆形与椭圆形为主，可见少量多边形，大多数细胞仍悬浮于培养液中，呈圆形或椭圆形，边缘有光泽。接种�～�后细胞完全贴壁。心房肌细胞大多呈梭形或三角形。��心房肌细胞鉴定间接免疫荧光原理间接免疫荧光细胞化学技术是根据抗原抗体反应的规律，用特异性抗体�豢�与相对应抗原结合，再用标记荧光素的二抗结合一抗，从而标记出目的抗原并通过一抗与二抗作用放大抗原抗体反应效应，得到较之直接荧光法�鲇�荧光素标记的一抗，不用二抗�銮康挠ü庑Ч����．�姆考∠赴�庖哂ü獠街���赴�榔�培养���〕霾Ｆ��の碌腜�洗涤����次；��％的多聚甲醛，固定室温���琍�洗涤���次；��．�������吹����次；��％��椅路獗��加兔抗大鼠�猄�抗体�：�稀释�℃过夜；���洗����次；��友蚩雇肐�—���：��∈�，�℃���琍�洗�����弘���琍�洗���次；��尤��豯的封片剂封片。�姆考∠赴�仕笮危�糠指阶琶婊��显增加而失梭状成三角形，之后附着面积继续增�疞，���疞，����的��加�����结果国际心血管病杂志��年�碌��淼�期���������肛���琈����，����琋����．������·万方数据
中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤较小。两者加。与心室肌比较，细胞形态有区别，心室肌细胞呈梭形、多角形、不规则形，核仁清晰可见，单个细胞贴壁后可节律性搏动‘”�６�姆肯赴�蠖嗍��梭形或三角型，体积较小，且无自律搏动������％细胞的培养�猄�抗体免疫荧光染色阳性����Ｅ嘌���赴�每勾笫骯—��固�免疫荧光染色阳性显影，同视野细胞核��染色显影，可见细胞核的数量多于�猄�抗体阳性细胞数量，说明部分非心房肌细胞未染色。�猄�为横纹肌细胞特异性表达的蛋白之一，我们分离取出的是心房组织，因此�猄�抗体免疫荧光染色阳性的细胞为心房肌细胞。�致�由于分离培养技术的难度较大，人工培养心房肌细胞成本高，细胞数量相对较少，加之新生鼠心房肌细胞不具备繁殖能力，不可传代，在一定程度上制约了对心房肌细胞的研究。我们利用酶消化法成功培养出大鼠乳鼠心房肌细胞，经纯化、鉴定，细胞数量可以满足一般实验要求。在整个心房肌细