酪蛋白的制备3.doc

文档介绍：酪蛋白的制备
一，原 理
等电点沉淀（选择性沉淀）利用蛋白质在等电点时溶解度最低的性质。
注意：调节溶液到蛋白质等电点时，可以使蛋白质溶解度最低，但是并不意味着蛋白质会沉淀出来。
二，
40℃水浴预热10分钟(HAC缓酪蛋白的制备
一，原 理
等电点沉淀（选择性沉淀）利用蛋白质在等电点时溶解度最低的性质。
注意：调节溶液到蛋白质等电点时，可以使蛋白质溶解度最低，但是并不意味着蛋白质会沉淀出来。
二，
40℃水浴预热10分钟(HAC缓冲液同时预热)用滴管加入醋酸缓冲液约2ml()离心，10000转/分，5分钟。
1、布朗运动加速蛋白分子的碰撞
2、等电点附近蛋白质的溶解度最低
用4ml蒸馏水洗涤离心，10000转/分，5分钟
除去沉淀中的可溶部分
95%乙醇洗涤离心，10000转/分，5分钟
除去沉淀中的脂类物质
脱水
***2ml洗涤离心，10000转/分，5分钟
进一步脱水
NaOH 2ml溶解
酪蛋白是酸性蛋白质，溶解于碱性溶液中，方便下次双缩脲法测定其含量。
三，仪器操作和基本操作
离心机操作的注意事项
，必须事先在天平上精密地平衡离心管和其内容物，平衡时重量之差不得超过各个离心机说明书上所规定的范围，每个离心机不同的转头有各自的允许差值，转头中绝对不能装载单数的管子，当转头只是部分装载时，管子必须互相对称地放在转头中，以便使负载均匀地分布在转头的周围。
，应随时观察离心机上的仪表是否正常工作，如有异常的声音应立即停机检查，及时排除故障。离心时不准开盖，不准用手停止转头。