文档介绍：摘要摘要多环芳烃(PAHs)是一类广泛分布于海洋环境中的典型的持久性有机污染物(POPs),通过食物链的传递会对生态环境和人体健康造成极大危害。了解PAHs在环境中的来源、分布、归宿及去除问题,已成为当今环境科学研究的前沿课题。生物降解是环境(土壤,沉积物,水体)中PAHs去除的最主要途径。研究其遗传控制方式,探索代谢途径,是为了更好地将降解菌应用于有效而可控的生物修复之中。本论文将采集自厦门博坦油码头的海水样品,在持续性的高浓度、高分子量PAHs选择压力下进行富集驯化,获得高分子量PAHs的降解混合菌系,并以此讨论高分子量多环芳烃()降解菌的筛选策略;同时对筛选获得的2株能高效降解PAHs的细菌从生理生化角度、基因组学、蛋白质组学方面进行较为系统的研究,探讨其降解特性,解析相关功能基因及功能酶,并在这些基础上推测其代谢途径。获得的主要结果如下:(1000m班),混合n钮s(菲,芘,荧葸,苯并(a)芘)作为选择压力,从采自石油污染地区样品中驯化获得混合降解菌系,从中分离得到3株可培养单菌,变性梯度凝胶电泳(PCR—DGGE)跟踪分析驯化过程中的细菌群落结构变化及优势菌形成过程。采用高效液相色谱(HPLC)测定混合菌系BL和3株单菌BLOl,BL02,BL03对高分子量、难降解的PAH_苯并(a)芘的降解能力,结合DGGE结果分析菌系中各单菌在降解过程中的作用。结果显示BL02,BL03不具有降解BaP的能力,%,%;%的BaP,这在同类报道中处于较高水平,显示了BL对BaP有较好的降解能力。,因此采用高浓度、。,经过一定时间的PAHs富集培养之后,采用改良的平板升华法成功地筛选到两株菲高效降解菌,降解能力测定显示,它们都能以菲和荧葸作为唯一碳源生长,72h后均能完全降解起始浓度为lOO摘要mg/L的菲。16SrDNA鉴定结果显示这两株分别为鞘氨醇单胞菌印触妒mD,,.f“。,,2一萘酚,邻苯二酚,初步推测它以水杨酸途径代谢菲,菌株S8不能降解萘,能利用原儿茶酸,但是不能利用邻苯二甲酸,很可能是以邻苯二甲酸以外的途径代谢菲。降解菌降解荧葸的优化条件实验结果显示,非离子表面活性剂T、Ⅳeen-。,其中环羟基化双加氧酶(RHDs)控制苯环加氧,是微生物降解反应的限速步骤,邻苯二酚双加氧酶是催化苯环开裂的重要酶。我们通过引物设计的方法,从降解菌5叻f,—,3·双加氧酶基因(C230)和环羟基化双加氧酶大亚基p矗以),,(C230)和环羟化双加氧酶基因0【亚基(p^剃)。对p办删基因构建了重组表达载体,成功在表达宿主大肠杆菌EcD,fBL21(DE3)中进行表达,基因在宿主中以溶解蛋白形式存在。,再在C230的作用下经由水杨酸途径间位裂解(m吡cl铋vage)苯环,(2一HMS)。(一向凝胶电泳)(双向凝胶电泳)(串联质谱),(对照)状况下的蛋白质表达,对差异蛋白的生物质谱结果进行分析,得到多个代谢途径中的关键酶(加氧酶、脱氢酶、醛缩酶等),,。关键词:多环芳烃,生物降解,苯并[a]芘,鞘氨醇单胞菌,双加氧酶,代谢途径2AbstractnlepresenceofpolycyclicaromatichydrocarbonS(PAHs)hemicalstabili吼K曲recalcit眦cet0dif!【∞archaimedatfindingb呶缸acapable0fbfe