文档介绍：实验项目:荧光分光光度法测定维生素B2的含量【实验题目】荧光分光光度法测定维生素B2的含量【实验目的】1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能,掌握其基本操作。【实验原理】维生素B2(又叫核黄素,VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。其结构式为:由于分子中有三个芳香环,具有平面刚性结构,因此它能够发射荧光。维生素B2易溶于水而不溶于***等有机溶剂,在中性或酸性溶液中稳定,光照易分解,对热稳定。维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下,发出绿色荧光,荧光峰在535nm附近。维生素B2在pH=6~7的溶液中荧光强度最大,而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系,因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素,光黄素也是一个能发荧光的物质,其荧光比维生素B2的荧光强得多,故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内,且在避光条件下进行。在稀溶液中,荧光强度F与物质的浓度c有以下关系:F=,荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系:F=Kc这是荧光光语法定量分析的依据。【主要仪器与试剂】主要仪器:F-2500HiTachi荧光分光光度计;1cm石英皿;50mL容量瓶;5mL移液管;烧杯;胶头滴管试剂:维生素B2标准溶液:未知液4【实验内容及步骤】1、系列标准溶液的制备取维生素B2标准溶液()、、、、,各加入去离子水稀释至刻度,摇匀。标记为①②③④⑤的一系列维生素B2标准溶液。待测。2、,加入去离子水稀释至刻度,摇匀。待测。3、激发光谱和荧光发射光谱的绘制设置λem=540nm为发射波长,在250~500nm范围内扫描标准溶液③,记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线,便得到激发光谱。从激发光谱图上找出其最大激发波长λex。在此激发波长下,在400~600nm范围内扫描,记录发射强度与发射波长间的函数关系,便得到荧光发射光谱。从荧光发射光谱上找出其最大荧光发射波长λem。4、标准溶液及样品的荧光测定将激发波长固定在最大激发波长λex,荧光发射波长固定在最大荧光发射波长处λem。扫描蒸馏水和上述5个标准液的荧光发射强度。数据记录于表1中。以溶液的荧光发射强度为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,制作标准曲线。在同样条件下测定未知溶液的荧光强度,并由标准曲线确定未知试样中维生素B2的浓度,计算待测样品溶液中的维生素B2的含量。【数据记录与结果分析】①、维生素B2激发光谱图:最大激发波长λex=373nm②、维生素B2