文档介绍：第四节基因工程

一、基因工程定义
•是指在基因水平上的遗传工程,它用人为方法将所需要的
某一供体生物的遗传物质——DNA大分子提取出来,在
离体条件下用适当的工具酶进行切割后,把它与作为载体
的DNA分子连接起来,然后与载体一起导入某一更易生
长、繁殖的受体细胞中,以让外源遗传物质在其中“安家
落户”,进行正常的复制和表达,从而获得新物种的一种
崭新育种技术。可以超远缘杂交。

二、基因操作的基本步骤
细菌供体细胞
取出质粒取出DNA分子
用相同的限制酶切出粘性末端用限制酶切取目的基因
将目的基因插入质粒切口
用连接酶将目的基因与质粒相连
将重组DNA分子导入受体细胞
重组DNA分子增殖、表达
目的基因产物

基
因
工
程
的
基
本
步
骤

三、基因工程的基本操作
:
①从适当的供体细胞的DNA中分离;
②通过反转录酶的作用由mRNA合成cDNA;
③由化学方法合成特定功能的基因。

载体必须具有以下条件:
①是一个有自我复制能力的复制子;
②有较高的复制率:即能在受体细胞内大量繁殖;
③载体上最好只有一个限制性内切核酸酶的切口,
使目的基因能固定地整合到载体DNA的一定位置
上;
④载体上必须有一种选择性遗传标记。

常用载体
u原核受体细胞:细菌质粒和λ噬菌体
u真核受体细胞:
u 动物:SV40病毒
u 植物:Ti质粒

受体细胞有:微生物细胞、动物细胞和植物细
胞。其中微生物细胞中使用最广泛的是E. coli,
另外枯草杆菌和酿酒酵母也越来越多地用作基因
工程中的受体。
5. 重组受体细胞的筛选和鉴定
6. 工程菌或工程细胞的大规模培养

第五节菌种的衰退、复壮及保藏

性状稳定的菌种是微生物学工作最重要
的基本要求,否则生产和科研都无法正
常进行!