文档介绍:实验四 血红蛋白的提取
血红蛋白的制备:
取新鲜抗凝全血5ml(可先将柠檬酸三钠用水溶解后再取鸭血),于2000r/min离心10min,弃血浆,﹪Nacl溶液洗血球(颠倒混匀)。离心弃去上清液,重复1~2次,至实验四 血红蛋白的提取
血红蛋白的制备:
取新鲜抗凝全血5ml(可先将柠檬酸三钠用水溶解后再取鸭血),于2000r/min离心10min,弃血浆,﹪Nacl溶液洗血球(颠倒混匀)。离心弃去上清液,重复1~2次,至上清液清完为止。于血球中加入10倍体积的蒸馏水,混匀,使血球破碎,以棉花过滤,即得血红蛋白溶液。
仪器及试剂:离心管(×10 ,10支) 试剂瓶(500ml 2支;250ml 2支)
Nacl(1瓶) 柠檬酸钠(1瓶)
溴酚蓝溶液的制备(1mg/ml):
称25mg溴酚蓝溶于25ml蒸馏水中即可。
仪器及试剂:溴酚蓝(1瓶) 滴瓶(5个 50ml)
洗脱瓶:
用锥形瓶(下有开口)作洗脱瓶。
仪器及试剂:锥形瓶 量筒(10ml 50ml)
洗脱液:
,溶于4000ml, Nacl溶液。
仪器及试剂:烧杯 电子天平 容量瓶 玻璃棒
操作步骤:
凝胶溶胀
置蒸馏水中于室温下溶胀3h,沸水浴1h再用蒸馏水洗涤几次,再次将沉降缓慢的细小颗粒随水倾倒(以免在装柱后产生阻塞现象,降低流速)。洗涤后将凝胶浸泡在洗脱液中待用。【G-75以下称硬胶;G-75以上的称软胶(吸水量大,膨胀形态柔软易变);G25:; G10-50:分离肽及脱盐;G75-200:各类蛋白质,全渗透。葡聚糖凝胶具有很强的吸水性,交联度大,吸水性小,相反交联度小,吸水性大。商品名以SephadexG表示,G值越小,交联度越大,吸水性越小】
装柱
采用脱盐柱,即将无机盐或其他物质(溴酚蓝)与大分子