文档介绍：关于血红蛋白提取
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课题背景: 血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分。负责血液中O2和CO2的运输。
两部分组成。
血细胞中______四十七页哦
回忆复习------血液组成成分
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知识填空----血液组成成分：
血液由______和_______两部分组成。
，红细胞中含量最多的有机化合物是_________________
__________和________________
构成的，其中每条肽链中都含有一个能
与O2或CO2结合的___________基团，因
其含有________而呈红色。
血浆
血细胞
红
血红蛋白
2条α-肽链
2条β-肽链
血红素
亚铁血红素
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本课题可选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的红细胞来分离血红蛋白
选材:
思考：为什么以哺乳动物的红细胞为材料？
无细胞核，无细胞器等结构，血红蛋白含量丰富，便于提取。
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(1)红细胞的洗涤
(2)血红蛋白的释放
(3)分离血红蛋白溶液
样品处理
粗分离
纯化
纯度鉴定
透析除去分子较小的杂质
通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去
通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯度
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（1）红细胞的洗涤
血液
100mL
低速短时间离心
红细胞
血 浆
吸出血浆
红细胞
5倍体积生理盐水
搅拌10min
步骤1、样品处理
阅读教材P67思考：洗涤的目的是什么？用什么水洗涤？洗涤干净的标志是什么？
重复洗涤3次，直至上清液没有黄色
？
3g柠檬酸钠
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注意：红细胞洗涤采用低速短时间离心！
∵速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果！
◆洗涤的目的------除去血浆蛋白等
◆用什么水洗涤？-----%的生理盐水
◆洗涤干净的标志-----上清液没有黄色
答案：
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初次离心后的结果：
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步骤1“样品处理”---(2)血红蛋白的释放
？
？
分析：
①蒸馏水的作用是__________________________。
②加入甲苯的作用是________________________。
③充分搅拌的目的是________________________。
使红细胞大量吸水胀裂
溶解红细胞的细胞膜
加速红细胞破裂
阅读教材P67思考：
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参观-----磁力搅拌器
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步骤1“样品处理”---(3)分离血红蛋白溶液
分离过程:
红细胞
混合液
高速离心
10min
如何除去小分子脂类物质？
？
过滤
滤纸
脂类物质
血红蛋白
----过滤！
收集滤液于分液漏斗得到下层红色液体！
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透析袋
步骤2、粗分离（即透析）
20mmol/L磷酸缓冲液
1mL
1mL
思考回答：透析的原理及目的分别是什么？
透析的原理----半透膜的半透性(教材P67)
透析目的----
除去分子量
较小的杂质！
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实际操作的透析袋
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（粗分离）透析过程动画演示：
演示结束
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步骤3、纯化----凝胶色谱操作
教材P68图5－19
（1）凝胶色谱柱的制作：
（2）凝胶色谱柱的装填：
（3）样品的加入和洗脱：
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（1）凝胶色谱柱的制作：(见教材P67)
①取长40厘米，，两端磨平。
②底塞的制作：打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→
覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好插入玻璃管的一端
注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮
塞的凹穴底面。否则难以铺实尼龙网，还会导致液体
残留，蛋白质分离不彻底。
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③顶塞的制作：打孔→安装玻璃管。
④组装：将上述三者按相应位置组装成整体
如图：装配好的凝胶柱
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材料：交联葡聚糖凝胶(G-75)
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