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实验目的
1、进行菊花的组织培养
2、尝试植物激素的应用
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通过必修课的学****我们已经了解到大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有没有不用种子来培育植物的方法的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
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(1) 取1000ml烧杯一只，加大量元素10倍母液100ml，微量元素100倍母液10ml，铁盐100倍母液10ml,有机物质100倍母液10ml。此外,根据培养材料和实验目的还要附加一定量的生长素,细胞分裂素及蔗糖等,然后加水至1000ml,待蔗糖充分溶解后用1mol/L ,,如用琼脂条,则要加8g。
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(2)将盛有培养基的烧杯在电磁炉上，煮至琼脂完全融化，补加蒸馏水至1000ml。
将配制好的培养基分装到培养用三角瓶中，每只100ml三角瓶约装40ml培养基。
分装时要避免把培养基倒在瓶口上，否则培养时容易引起杂菌污染。
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（1）把装好的培养基的三角瓶放入高压灭菌锅中，盖好锅盖。
（2）设置灭菌温度参数为121℃，20min，开始灭菌。
3、灭菌
无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键．
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（二）外植体（离体组织）消毒
注意：对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。
1、70﹪酒精中浸泡10min，无菌水冲洗
2、5%次***酸钠溶液中浸泡，无菌水冲洗
3、用另一5%次***酸钠溶液浸泡5min，无菌水冲洗
4、超净台中用无菌水多次冲洗
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（三）切段后接种
1、先用肥皂洗手，穿上工作服，戴上口罩和工作帽。
2、放入培养瓶和灭菌后的接种用具(镊子、解剖刀、接种针)，把镊子、解剖刀、接种针插入内盛70%酒精的广口瓶中。
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3、在酒精灯火焰旁，打开三角瓶，把花茎用无菌解剖刀切成几段，每段至少有一张叶片
4、切段插入培养基，诱导愈伤组织，盖上封口膜。
5、愈伤组织插入生芽培养基，盖上封口膜。
6、用记号笔在瓶壁上写明培养材料、培养基代号、 接种日期。
注意事项
全部接种操作都是在无菌条件下进行的，所以要特别认真仔细，以防杂菌污染。
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（四）培养
接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养。培养期间应定期消毒，温度控制在１８～２5℃， 。观察记录生长情况，并照相存档。
2~3周后将生长健壮的丛状苗在无菌条件下一个个转入生根培养基中，在上述条件下继续培养
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（五）移栽
（六）栽培
生根后，将苗移至消毒的草炭土或蛭石中，用玻璃罩或塑料布保持80%以上湿度，2~3天后打开玻璃罩低湿度锻炼
转移至土中培养（定植）
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三、结果分析与评价
（一）对接种操作中污染情况的分析
接种3～4 d后，在接种操作中被杂菌污染的培养物会表现出被污染的现象。请学生适时统计污染率，分析接种操作是否符合无菌要求。
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（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化
观察实验结果，看看是否培养出了愈伤组织，记录多长时间长出愈伤组织。统计更换培养基后愈伤组织进一步分化成根和芽的比例和时间。
（三）是否进行了统计、对照与记录
做好统计和对照，填好结果记录表，培养严谨的科学态度。从实验的第一步开始就要求做好实验记录，实验小组配制不同培养基，如诱导愈伤或直接分化丛芽的培养基，然后做不同配方的比较。
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（四）生根苗的移栽是否合格
生根苗移栽技术的关键是既要充分清洗根系表面的培养基，又不能伤及根系。一般使用无土栽培的办法。培养基质要提前消毒，可以向培养基质喷洒质量分数为5%的高锰酸钾，并用塑料薄膜覆盖12 h。掀开塑料薄膜后24 h才能移栽。新移栽的组培苗要在温室过渡几天，等壮苗后再定植大田或进行盆栽。学生可以在课后统计自己移栽的成活率，看看移栽是否合格。
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四、本课题知识小结
菊花的组织培养
原理：细胞的全能性
条件
基础