文档介绍：第五章分子生物学的常规技术(六) ——DNA文库的构建 和目的基因的筛选
基因文库:
也称DNA文库,是指某一生物体全部或部分基因的集合。
某个生物的基因组DNA或cDNA片段与适当的载体在体外重组后,转化宿主细胞,并通过一定的选择机制筛选后得到大量的阳性菌落(或噬菌体),所有菌落或噬菌体的集合即为该生物的基因文库(gene library)。
基因文库(Gene library):
由大量的含有基因组DNA(即某一生物的全部DNA序列)的不同DNA片段的克隆所构成的群体,称之为基因文库。
一个完全的基因文库,应该能够保证从中筛选到目的基因。
即 Genomic library
基因文库:
外源DNA片段
载体
宿主
等3个部分组成。
构建基因文库的基本程序:
①提取研究对象基因组DNA,制备合适大小的DNA片段,或提取组织或器官的mRNA并反转录成cDNA;
②DNA片段或cDNA与经特殊处理的载体连接形成重组DNA;
③重组DNA转化宿主细胞或体外包装后侵染受体菌;
④阳性重组菌落或噬菌斑的选择。
基因文库(外源DNA片段的来源)分为:
基因组DNA文库(genomic DNA library)
plementary DNA library)
基因组DNA文库:
是指将某生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段,再与合适的载体在体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落。
将庞大的基因组分解成许多片段,每段包含一个或几个基因。
cDNA文库:
cDNA文库代表生物的某一特定器官或特定发育时期细胞内转录水平上的基因群体。
由于基因表达具有组织和发育时期特异性,因此cDNA文库所代表的基因组具有同样的时空特性,它仅包含所选材料在特定时期里表达的基因,并不包括该生物的全部基因,且这些基因在表达丰度上存在很大差异。
基因组文库与cDNA文库最大的区别:
cDNA文库有时空特异性。
cDNA文库反映了特定组织(或器官)在某种特定环境条件下基因的表达谱,因此对研究基因的表达、调控及基因间互作是非常有用的。不包含基因间隔序列、内含子及基因的调控区.
基因组文库包含了基因的全部信息,、启动子及其所包含的调控序列等.
常用的文库筛选方法有:
核酸探针杂交法
抗体免疫法
差异杂交法。