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脑组织冰冻切片.doc

上传人:文库旗舰店 2022/4/6 文件大小:28 KB

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脑组织冰冻切片.doc

文档介绍

文档介绍:冰冻切片的保存
我做的脑组织,直接断头取脑,用OCT胶包裹脑组织,放入异戊烷中在-80度冰箱中速冻1分钟,取出后用锡箔纸包好,冻存于-80度冰箱保存。切片前-20度回温半小时,即可切片。冰冻切片也放-80度冰箱保存。做组化时用4%多聚甲醛冰冻切片的保存
我做的脑组织,直接断头取脑,用OCT胶包裹脑组织,放入异戊烷中在-80度冰箱中速冻1分钟,取出后用锡箔纸包好,冻存于-80度冰箱保存。切片前-20度回温半小时,即可切片。冰冻切片也放-80度冰箱保存。做组化时用4%多聚甲醛放4度固定15分钟。
如果标本量较多,需要保存一段时间后再冰冻切片,我目前是把标本经OCT包埋后,液氮速冻,待OCT完全冻硬变白后,转入-80度保存。这样处理的标本,切出来的片子很好看!也没有冰晶。
作了冰冻切片但不能马上染色,切片应如何保存呢?
如果想第二天做,可以直接放在4度,如果想多放几天,冰冻切片干后以冷丙酮固定10分钟,放入-20度冰箱保存至染色可行。我曾保存了一个多月都没问题。染色前,从冰箱取出后4度复温20min,再室温复温15min即可。用PBS洗后,即可接后续步骤。
两点个人经验,仅供参考:
1、 如果切片为40微米或者更厚,放在PBS中,液体要足够多,至少没过组织切片,建议用24或48孔细胞培养板,放好后将培养板四周用胶布或封口膜密封,以确保水份不蒸发,存放两个月不会出问题。
不过在移动细胞培养板时千万要注意保持水平,以免组织切片移到相邻的孔内,那样的话,就搞不清次序了!
2、如果切片为20微米或者更薄,先自然干燥,然后放切片盒中室温保存即可。一般3个月是不会有问题的。
正常包埋,然后将整个包埋块用封口膜封好,置于-20度或-80度(前者一般2个月没问题,后者时间更长),重点是防止包埋块的风干,当攒齐了不同时间点或者暴露于不同处理因素的标本后,一起切片,一起染色,效果很好。