1 / 9
文档名称:

DNA提取及PCR扩增实验报告.doc

格式:doc   大小:3,189KB   页数:9页
下载后只包含 1 个 DOC 格式的文档,没有任何的图纸或源代码,查看文件列表

如果您已付费下载过本站文档,您可以点这里二次下载

分享

预览

DNA提取及PCR扩增实验报告.doc

上传人:文艺人生 2022/4/18 文件大小:3.11 MB

下载得到文件列表

DNA提取及PCR扩增实验报告.doc

文档介绍

文档介绍:DNA提取及PCR扩增实验报告
PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳
刘琳 1131428 环境科学
一、实验目的
1.学习并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。
2.对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶
DNA提取及PCR扩增实验报告
PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳
刘琳 1131428 环境科学
一、实验目的
1.学习并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。
2.对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶电泳试验,并分析相应结果。
二、实验原理
1. PCR扩增
多聚酶链反应(PCR)技术的原理类似于DNA的天然复制过程。在微量离心管中加入适量缓冲液,加入微量模板DNA、四种脱氧核苷酸(dNTP)、耐热Taq聚合酶及两个合成DNA的引物,而后加热使模板DNA在高温下(94℃)变性,双链解链,这是所谓变性阶段。降低溶液温度,使合成引物在低温(55℃)与模板DNA互补退火形成部分双链,这是所谓退火阶段。溶液反应温度升至中温(72℃),在Tap酶作用下,用四种dNTP为原料,引物为复制起点,模板DNA的一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链,这是延伸阶段。如此反复,在同一反应体
板DNA 、TBE、琼脂糖、EB、显色剂。
实验步骤
1. PCR扩增
本次试验选择细菌16S rDNA V3区片段进行扩增。
根据计算, 10×Buffer 、1 ul dNTP、 ul 341GC、 ul 534、 ul Taq、 ddH2O的比例配置足量的PCR反应体系。
分别向9个薄壁管中分别加入24 ul的反应体系,并分别添加8种不同的模版,并于第9个薄壁管中加入无菌ddH2O作为阴性对照。
将薄壁管放入PCR扩增仪中,按照预定程序进行PCR扩增。其中循环过程需要达到30~40次。程序如下:
预变性: 94℃ 3min
循环: 94℃ 变性30s
55℃ 退火30s
72℃ 延伸30s
末次延伸:72℃ 5min
PCR扩增完成后,将样品取出并保存于
15℃环境中。
2. DNA琼脂糖凝胶电泳实验
,放到一锥形瓶中,×TBE电泳缓冲液。然后置微波炉加热至完全溶化,溶液透明。摇匀,待冷却至60℃左右,在胶液内加入适量的EB。
取有机玻璃制胶板槽,在一端插好梳子,在槽内缓慢倒入已冷至60℃左右的胶液,使之形成均匀水平的胶面。
待胶凝固后,小心拔起梳子,使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。
×TBE电泳缓冲液,至液面覆盖过胶面。取1μl缓冲液和5μl待测DNA样品混合后,用移液枪滴加至凝胶的加样孔中。
接通电泳仪和电泳槽,并接通电源,调节稳压输出,电压最高不超过5V/cm,开始电泳。点样端放阴极端。根据经验调节电压使分带清晰。
观察溴酚兰的带(蓝色)的移动。当其移动至距胶板前沿约1cm处,可停止电泳。
在紫外透视仪的样品台上重

最近更新

激励机制的功能 5页

第七章管理信息系统与组织管理创新 35页

浅谈人力资源中绩效与薪酬福利管理 4页

有关车辆租赁服务合同范本 6页

浅析人力资源管理对防止企业人才流失之对策 6页

2012年12月计算机病毒疫情分析 2页

毕业论文写作指南如何选择合适的研究题目 6页

机械制造企业预算管理优化研究——以TQ公司为.. 5页

本刊加入“万方数据-数字化期刊、群”声明 4页

有关美育的作文300字 5页

最新汇编国家开放大学会计学等五个专业毕业论.. 5页

最新2025新生代员工(90后) 3页

智能电厂的发电控制系统关键技术分析 4页

无氧阈的概念 5页

第二节《物体的质量及其测量》教案(北师大版初.. 1页

新时期加强油田企业人力资源管理的探索 5页

新形势下企业干部管理激励机制优化途径 6页

数据挖掘技术在客户行为分析中的应用案例 7页

防雷业务分类及发展变化 27页

探索绿色化学工程与工艺对化学工业节能的促进.. 3页

技能能力薪酬体系 6页

战略人力资源管理对企业企业绩效的影响研究 6页

防火墙功能与使用 18页

我国企业应用360度绩效考核存在的问题及对策 .. 4页

成本管理中的人力资源成本控制与激励 6页

微软员工激励分析 4页

强化门诊药房服务流程提高药学服务水平 6页

建筑经营行业个人工作总结3 3页

建立企业年金的可行性分析 5页

2025年吕梁职业技术学院单招职业适应性测试题.. 74页