第21章 高效液相色谱 PPT课件.ppt

文档介绍：第21章高效液相色谱法
概述
流动相是液体的色谱法称为液相色谱(liquid chromatography,LC)
液相色谱可分为平板色谱和柱色谱。前者如纸色谱和薄层色谱,后者如离子交换色谱等。现代高效液相色谱不同于传统液相色谱主要采用了高效色谱柱与高压输液泵。
高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。
高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料,流出速度极慢;而高效液相色谱配备了高压输液设备,流速最高可达103cm·min-1。
高效液相色谱配备了高效分离柱,比经典层析柱分离效率高。配有高灵敏度的检测器。
气相色谱法与液相色谱法比较
液相色谱法不受试样挥发度和热稳定性的限制,非常适合分离生物大分子,离子型化合物、不稳定天然产物以及各种高分子化合物等。
高效液相色谱法流动相可选用不同极性的液体,流动相对组分可产生一定亲和力,并参与固定相对组分作用的剧烈竞争,对分离起很大作用,相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数,这为选择最佳分离条件提供了极大方便。
高效液相色谱法包括四种基本类型:
分配色谱
吸附色谱(液固色谱)
离子交换色谱
尺寸排斥色谱(凝胶色谱)
21-1 液相色谱的柱效
一、液相色谱的速率理论
速率理论是在分析气相色谱分离原理后得出的速率方程,这个方程作适当修改后也适用于液相色谱。
与气相色谱不同的是:
由于液态流动相密度比气态流动相高4~5数量级,因此液相色谱分子扩散项可忽略不计。
流动传质阻力项与气相色谱有较大不同,见图21-2、21-3
在液相色谱中,可采用减小填料的孔穴深度、粒径、采用低粘度及流低速流动相、适当提高柱温等方式操作提高柱效。
二、液相色谱的柱外展宽
以前对色谱峰展宽因素的讨论只限于柱分离,液相色谱的柱外因素对谱峰宽度的影响也很大,进样系统、连接管件、检测器等,这是由于流动相在管壁邻近区的流速明显低于管中心区,导致柱外展宽。气相色谱谱峰展宽的主要因素是纵向扩散,而液相色谱则较大程度上受到柱外展宽的影响。