文档介绍：遗传学实验报告 4 植物多倍体的诱导及其细胞学鉴定丛乐 2005011007 生51班实验组: 1-1 同组成员:朱祎实验日期: 2008 年4月1 日星期二 I .实验目的 1. 了解和掌握植物多倍体诱导技术的原理和方法,巩固和提高制作压片和显微镜操作技术。 2 .在掌握上述技能的基础上,完成洋葱根尖多倍体细胞(秋水仙素诱导)压片的制作和观察。注意多倍体细胞的形态结构特点,特别是其染色体的数目和形态变化,进而通过对染色体进行分析来准确地辨识、判断多倍体细胞。 3 .如果视野中能够找到处于分裂中期的细胞且染色体排列分散而清晰,可以进行染色体计数, 并通过该物种双倍体的染色体数目判断出所观察的细胞为几倍体。 II. 实验原理(略) III. 实验材料和用具 1. 实验用具: 显微镜( Nikon , YS-100 型), 显微摄影系统, Schiff 试剂, 1M HCl 溶液, 解剖针, 解剖刀,恒温水浴锅,蒸馏水,滴管, 镊子,载玻片,盖玻片,吸水纸,镜油,搪瓷盘。(本实验中还使用 Carnoy 固定液和秋水仙素水溶液,操作由老师和助教完成) 2. 实验材料: 洋葱 IV .实验过程和步骤 1. 材料的准备和取材洋葱的培养、秋水仙素处理、固定的步骤已经由老师和助教们完成,所发处理好的洋葱根尖保存在乙醇中。 2. 解离(酸解法) 将所发放在小 EP 管中的洋葱根尖用蒸馏水反复洗涤 3 次后,放入已经在恒温水浴锅中预热至 60℃的 1M HCl 溶液中。在 60℃下温浴处理 10min ,用冷 1M HCl 溶液清洗 1 次。 3. 染色及压片。向上一步处理好的材料中加入 3滴 Schiff 试剂进行染色,把 EP 管用报纸包裹后,放在黑暗处染色 16min 。之后用滴管吸出染色液,加入蒸馏水洗净。将染色后的材料用镊子放在载玻片上,加上盖玻片,用2 张吸水纸盖在盖玻片上,用手指固定盖玻片,用手指按压在载玻片上进行压片,力度可逐步加大(只要不压碎盖玻片即可) ,多按压几次使细胞充分分散。 4. 镜检用4 倍物镜找到根尖细胞。换成 40 倍物镜找到分散较好,染色体清晰的细胞置于视野中心, 滴加镜油后使用 100 倍物镜观察, 用记号笔于载玻片上标记好视野中心, 以利于下一步显微摄影。 5. 显微摄影根据前述标记的坐标,在 20 倍物镜下定位染色体, 转换至 40 倍或者 100 倍物镜( 根据拍摄需要) ,利用显微摄影系统对视野中细胞进行拍照,保存数据。最后将仪器、用具和材料收拾整齐,将桌面清理干净,特别注意擦干净物镜上的镜油。 V .实验现象和结果利用 0 号机显微摄影系统进行拍照,得到如下所示的图像( 见图1 和图 2)。图1 洋葱根尖细胞( 10? 100=1000 倍, Schiff 试剂染色) 红色箭头示二倍体细胞染色体, 因为本次拍摄使用的是 0 号机,所以没有显示出标尺,下同。图2 洋葱根尖细胞( 10? 100 = 10 00倍拍摄后放大, Schiff 试剂染色) 将图 1 中虚线区域放大,并调整对比度所得,蓝色箭头示一对姊妹染色单体,共计 16对 32 条。<图1 、图 2 结果分析> 如图 1 所示, 首先可以根据细胞核染色后的结果, 结合细胞内染色体数量, 判断出视野中细胞为二倍体细胞( 相较于二倍体, 多倍体细胞的细胞核中 DNA