文档介绍：遗传学实验报告 6 小鼠骨髓细胞染色体制备及观察丛乐 2005011007 生 51班实验组: 1-1 同组成员:朱祎实验日期: 2008 年 4月 8 日星期二 I .实验目的 1. 了解和掌握使用小鼠骨髓细胞进行染色体制片的基本原理和实验方法。特别是学会并理解小鼠解剖收集骨髓细胞, 低渗液处理以及滴片等关键实验技术, 同时巩固和提高显微镜操作技术。 2. 在掌握上述技能的基础上, 完成小鼠骨髓细胞染色体滴片的制作和观察。注意细胞内染色体的形态和结构特点,从而更为深入地认识动物细胞的染色体。 3. 镜检时, 在所制备滴片中找到染色体排列分散而且染色体形态清晰的细胞, 进行染色体计数, 并与文献数据相互印证。 II. 实验原理(略) III. 实验材料和用具 1. 实验用具: 显微镜( Nikon , YS-100 型), 显微摄影系统, 改良苯酚品红染液, 低渗液(即 KCl )、固定液( 甲醇、醋酸二者体积比 3:1 ), 解剖剪, 注射器, 离心机( Sigma ), 恒温水浴锅,滴管, 镊子, 离心管,烧杯, 载玻片,盖玻片,镜油,搪瓷盘。(本实验中还使用秋水仙素水溶液对小鼠提前进行处理,操作由老师和助教完成) 2. 实验材料: 小鼠( M us musculus ) IV .实验过程和步骤 1 .小鼠腹腔注射秋水仙素溶液这项操作由老师和助教们提前完成,感谢! 2 .取材和收集骨髓细胞将处理后的小鼠放到解剖盘上,用断颈法迅速将小鼠处死。解剖后将其两支股骨取出,用解剖剪将附着在股骨上的肉剥离干净。用解剖剪将股骨头的两端剪开,暴露出骨髓腔。用注射器吸取已经提前在 37℃下温育的低渗液共 , 将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓。最后将两根股骨的冲洗液汇集到同一个 5mL 刻度离心管内,使冲洗液达到 5mL 。 3 .低渗。用吸管将冲洗液吹打均匀,然后把离心管放在 37℃的恒温水浴锅中低渗 20min 。 4 .重复固定和离心低渗结束后将离心管取出,加入 lmL 固定液,吹打均匀后放到 37℃水浴锅中固定 10min 。之后在 1200rpm 离心 10min 。离心后弃上清,加入固定液 1mL ,吹打均匀后在 37℃下再固定 10min 。之后再次在 1200rpm 离心 10min 。 5 .制备骨髓细胞悬液。离心后弃上清,小心不要将沉淀悬起。最后留约为沉淀量 5 倍的上清液,吹打成细胞悬液。 6. 滴片。从冰箱或冰盒内取出放在乙醇中预冷的载玻片, 擦干。在地面上铺报纸,将4 张载玻片并排摆在一起,将细胞悬液用吸管在载玻片上方约 处向下滴片。 7. 干燥,染色,去浮色在室温下将载玻片晾干,利用纸张扇风以加快蒸发速度,在载玻片上滴加改良苯酚品红染液,染色 15min 。染色结束后用清水将染料轻轻冲去,晾干。 8. 镜检用4 倍物镜找到细胞密集的区域。换成 40 倍物镜找到分散较好, 染色体清晰的细胞置于视野中心,用记号笔于载玻片上标记好视野中心,以利于下一步显微摄影。 9. 显微摄影根据前述标记的坐标,在 40 倍物镜下定位细胞, 滴加镜油, 转换至 100 倍物镜, 利用显微摄影系统对视野中细胞进行拍照,保存数据,本次实验进行操作测试,共有记录时间 10min 。最后将仪器、用具和材料收拾整齐,将桌面清理干净,特别注意