文档介绍：第五章第五章愈伤组织的诱导愈伤组织的诱导和植株再生和植株再生愈伤组织的诱导和植株再生愈伤组织的诱导和植株再生愈愈伤伤组组织织的的诱诱导导再再生生途途径径愈伤愈伤诱导诱导和植和植株株再再生生的的机制机制影响影响愈伤愈伤诱导诱导和植和植株株再再生生的的因素因素 1. : 意义: 2. : 愈伤诱导的过程: 3. : 诱导条件: 4. : 愈伤的继代: 5. : : 6. 6. 长期培养物形态发生潜力的丧失长期培养物形态发生潜力的丧失: : 愈伤组织的愈伤组织的诱导诱导( ( callus callus induction induction ) ) 1. : 意义: 从理论上讲:是细胞全能性( totipotency ) 实现的主要途径; 从实践上讲:组织培养的目的,绝大多数情况下是要获得再生植株。而绝大多数离体组织、细胞的形态建成都要先经过脱分化成为愈伤组织才能再生。所以愈伤组织诱导是植物组织培养的关键技术之一。愈伤组织的愈伤组织的诱导诱导 2. : 愈伤诱导的过程: 启动期启动期(诱导期),为细胞分裂做准备,细胞大小不变,合成代谢活跃, RNA 含量增加,核体积增大; 分裂期分裂期:外层细胞开始分裂,细胞变小,当体积最小,细胞核和核仁最大,细胞内无大液泡, RNA 含量最高时,进入高峰。分化期分化期(形成期):细胞分裂深入到局部内部,形成拟分生组织,最后可以分化成维管组织。愈伤组织的愈伤组织的诱导诱导 3. :(除外植体外) 激素激素:一般需要 2,4- D, 高浓度的其他生长素也可以;有时适当添加细胞分裂素可提高愈伤的质量,利于分化;极少数物种(白芜箐)可用细胞分裂素诱导愈伤; 培养基的盐浓度培养基的盐浓度:一般高盐培养基、还原态氮等; 其他附加物其他附加物: AgNO3 抑制内源乙烯,利于细胞分裂。愈伤组织的愈伤组织的诱导诱导 4. 4. 愈伤的继代愈伤的继代:愈伤可以在诱导培养基上继代,为使愈伤生长更加健康,也可以适当减少 2,4-D 的浓度。可以用液体培养基悬浮培养继代。愈伤组织的愈伤组织的诱导诱导 5. 5. 愈伤的遗传愈伤的遗传特点特点:体细胞无性系变异( somaclonal variation ) 在愈伤组织培养过程中经常出现。可以有染色体倍性变化、数目变化、结构变异、点突变等。与后生遗传变异( ic variation ) 不同。无性系变异是愈伤组织失去分化能力的主要原因,可以在育种上作为一种诱变方法加以利用( p159, 第9章 p211 )。愈伤组织的愈伤组织的诱导诱导 6. 6. 长期培养物形态发生潜力的丧失长期培养物形态发生潜力的丧失: 胚性愈伤和非胚性愈伤遗传说遗传说:认为遗传物质的变化,如多倍化、非整倍体、基因突变等;不可逆。生理说生理说:由内源激素不平衡等生理因素引起,有时可逆。如胡萝卜悬浮培养物加活性炭可恢复胚性。竞争说: 竞争说: 认为非胚性愈伤的生长速度比胚性愈伤快, 继代久了,胚性愈伤越来越少,最后丧失分化能力。愈伤组织的愈伤组织的诱导诱导愈伤组织的诱导和植株再生愈伤组织的诱导和植株再生愈愈伤伤组组织织的的诱诱导导再再生生途途径径愈伤愈伤诱导诱导和植和植株株再再生生的的机制机制影响影响愈伤愈伤诱导诱导和植和植株株再再生生的的因素因素