文档介绍：第四章核酸电泳与检测
核酸凝胶电泳
用于分离、鉴定和纯化DNA或RN***段
优点：
便于分离；便于检测；便于回收

琼脂糖凝胶电泳是以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达可用来检测单链或双链核酸
（3）EB使用时的配制、贮存及使用
EB常用水配制成10 mg/ml的贮存液，于室温保存在棕色瓶或用铝箔包裹的瓶中， μg/ml 。
（4）当要知道DN***段准确大小时，凝胶应在无EB情况下电泳，电泳结束后再用EB染色。
EB替代品
SYBR Gold是一种新型极敏感染料的商品名称。其与DNA结合的亲和力高，并且结合后，能够极大增强荧光信号。
sybr-green、sybrgold ---- 不稳定，毒性也很大
goldview ----宣称无毒,不灵敏,回收连接不好,荧光易猝灭。对于大片段DNA的染色效果还凑合，但是在对于500bp以下的片段效果不是很好。
GelRed/GelGreen低毒,效果很强!但价格昂贵。
（3）结果分析
提取细菌基因组电泳图
琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡过程中
DNA Ladder的形成
PCR产物的电泳
RNA电泳图

1、溴乙锭(EB)是诱变剂，应戴乳胶手套。凡是沾污过溴乙锭的器皿或物品,必须经专门处理后，才能进行清洗或弃去。
    2、加样量的多少决定于加样孔最大容积。加入样品的体积应略少于加样孔容积。

DNA带很淡或无带
DNA带拖尾

紫外吸收法、定磷法
（1）目测条带亮度来判断DNA浓度跑胶时候marker 按说明书的量上样电泳，电泳完毕后，就可将目的DNA条带和marker 条带的亮度做个大致的比较。       找出两者最接近亮度的条带。根据条带的亮度、大小大致就可推测目的DNA的浓度。在通过目测DNA浓度的时候，最好要把加样量设一个梯度，如果质粒的量很浓的话。
（2）分光光度法
DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。
波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。
对标准样品来说，浓度为1μg / ml时，DNA钠盐的OD260＝
当OD260＝1时，dsDNA浓度约为50μg / ml
               ssDNA浓度约为37μg / ml
               RNA浓度约为40μg / ml
               寡核苷酸浓度约为30μg / ml（由于底物不同有差异
当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。
一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230，计算其比值来衡量样品的纯度。
经验值：
纯DNA：OD260/OD280≈(＞,表明有RNA污染；＜，表明有蛋白质、酚等污染）
纯RNA：＜OD260/OD280＜（＜；＞***酸残存）
若样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量，可使用方案二的方法或其他方法进行估算。
操作步骤
1、  UV-240紫外分光光度计开机预热10min.
2、  用重蒸水洗涤比色皿，吸水纸吸干，加入TE缓冲液后，放入样品室的S池架上，关上盖板。
3、  设定狭缝后校零。
4、  将标准样品和待测样品适当稀释（DNA5μl或RNA4μl用TE缓冲液稀释至1000μl）后，记录编号和稀释度。
5、  把装有标准样品或待测样品的比色皿放进样品室的S架上，关闭盖板。
6、  设定紫外光波长，分别测定230nm、260nm、280nm波长时的OD值。
7、  计算待测样品的浓度与纯度。
DNA样品的浓度（μg / μl）:OD260×稀释倍数×50/1000
RNA样品的浓度（μg / μl）：OD260×稀释倍数×40/1000
（3）溴化乙锭法
溴化乙锭（EB）插入堆积碱基之间。结合的EB的荧光产率远大于游离EB的荧光产率。荧光强度正比于嵌入溴化乙锭的量。 EB结合量的多少与DNA的大小和构型有关，对于单一构型的同种DNA样品来说，溴化乙锭的嵌入量与样品溶液的DNA含量成正比。
基本过程同