免疫荧光实验操作步骤及详细说明.docx

文档介绍：免疫荧光（IF ）实验操作步骤及详细说明
一、试剂和溶液
10X PBS：80g NaCl，2g KCl, Na2HPO4 和 KH2PO4 加 1L 纯水，
调 pH 至 洗涤液：lx PBS :纯水稀免疫荧光（IF ）实验操作步骤及详细说明
一、试剂和溶液
10X PBS：80g NaCl，2g KCl, Na2HPO4 和 KH2PO4 加 1L 纯水，
调 pH 至 洗涤液：lx PBS :纯水稀释 10X PBS ； lx PBST :含 % Tween-
20的lxPBS固定液：4%多聚甲醛：4g多聚甲醛溶于100ml PBS通透液：% triton-l00 封闭液： PBS 配制的 3% BSA 抗体稀释液：一抗稀释液： 3% BSA； 二抗及鬼笔环肽稀释液： 1X PBS； DAPI: 纯水稀释
二、实验步骤
细胞爬片：将盖玻片在酒精灯上灼烧片刻灭菌，铺在 12 孔板中，然后 接种细胞，置于37口，5% CO2培养箱过夜，待细胞形态完全伸展开并 且处于健康状态，细胞密度为 40%-50%（做爬片的细胞一般 是复苏细 胞传代 2 代后的细胞）；
洗涤：倒掉细胞培养液， 1xPBS 轻微振荡洗涤 2 次,每次 5min；
固定：4%多聚甲醛固定细胞，室温放置20min,倒掉多聚甲醛，加入适 量 PBS；
4•冻存：-20 □保存（如果直接使用，可跳至7）；
解冻：常温下放置 30 min；
洗涤： PBS 轻微振荡洗涤 2 次,每次 5min；
通透：加入适当体积的通透液室温放置10min。（若蛋白为膜表达则无
需此步）
洗涤： PBS 轻微振荡洗涤 2 次,每次 5min；
封闭：加入适当体积的封闭液，室温放置 30 min；
—抗孵育:倒掉封闭液，加入适当体积及浓度的一抗,7□孵育60min ；
洗涤：PBST轻微振荡洗涤3次，每次5min ；
二抗孵