文档介绍：第五章 色谱柱
色谱柱
确认填充柱与毛细管柱的区分
计算柱效和分别度
介绍快速色谱
介绍保留时间锁定功能
理解柱的选择性
确认柱操作的步骤
学****炉温的恒温操作和程序升温操作
样品
流动
相
固定
相
分别的过程示意第五章 色谱柱
色谱柱
确认填充柱与毛细管柱的区分
计算柱效和分别度
介绍快速色谱
介绍保留时间锁定功能
理解柱的选择性
确认柱操作的步骤
学****炉温的恒温操作和程序升温操作
样品
流动
相
固定
相
分别的过程示意图
安排填充
填充柱
载气
液体相
固体支撑物
特别多的孔具有极大的表面积
气液色谱 (GLC)
壁涂开管柱 (WCOT)
液体相
毛细管柱
(占应用的90%)
“相似相溶"
或
同极性相互作用
通过样品在固定相中的分配或不同溶解度实现分离
组分基于不同的极性而分离 (偶极力的作用)
通常
例如： 醇类是极性化合物
聚乙二醇(Carbowax)是极性固定相
气液色谱 (GLC)
A
B
C
D
气流
色谱过程示意图
柱效: 色谱柱形成尖锐峰的能力
分离度: 色谱柱将两个峰彼此分开的能力
选择性: 色谱柱确认两个峰化学与/或物理性质差别的能力
优
差
优
差
柱分别指标
分析物
时间
进样
不保留组分
t
m
t
R
'
t
R
我们希望知道组分保留在固定相中的真实时间。
将 n与柱长相比：
或
每米塔板数 (N) =
n
L
每块理论塔板高度 (HETP) =
n
L
因此，柱效越高， “N”值越大， “HETP”值越小
n =
t
R
'
W
h
2
t
R
-
t
m
=
t
R
'
t
R
'
t
R
'
计算柱效
R
t '
= 调整保留时间
n = 有效理论塔板数
Wh=半峰宽
柱长 (cm)
不保留组分的保留时间 (sec)
线速度 =
估算不保留组分的保留时间
如果溶剂是流出的第一个组分，就使用它的保留时间。
也可从打火机中取 5cc丁烷气，使用丁烷峰的保留时间。
GC/MS用空气的保留时间
使用如下公式来估算柱长： Length = dk
其中 d = 柱卷成的圈的直径
k = 柱圈圈数
=
使用下面的公式，可利用线速度计算流量
流量 (ml/min) = r 2 m60
其中 r = 柱半径 cm
m = 平均线速度 cm/sec
60 = 从 sec 到 min 的转换因子
测量线速度和流量
HETP
C 传质阻力项
A 涡流项
分子扩散项
m ( opt m)
}
}
B
{
HETP = A +
+ C
m
B
m
柱效受载气线速度和流量影响。
曲线的最低点代表最小板高 HETP (或最大每米理论塔板数) 也就是最好的柱效。 毛细管柱中不存在“A”项。
柱效与载气线速度
HETP与线速度形成的曲线叫做范德姆特曲线。
曲线最低点的线速度值即为可获得最好柱效的最佳线速度值。
1. 运用内径更小的柱子。
2. 减小固定相百分组成或固定相液膜厚度。
3. 减小进样量。
4. 选用更长的柱子。
5. 运用程序升温改善后流出组分峰形。
@ 好的进样技术可以保障高柱效。进样应当紧凑快速，
以免峰展宽。
如何提高柱效
时间 ( Min.)
4
5
6
响应值
RT =
RT =
RT =
分别度是柱将两个相邻峰分开实力的反映。
通过两个欲分别相邻峰的分开程度来测算分别度。一般我们选择两个最难分开的
峰，假如它们被成功分开，那么其它的也就解决了。
( RT - RT )
2
1
(W + W )
1
2
R =
R = 认为可以实现基线分别
W1=化合物1的半峰宽
W2=化合物2的半峰宽
分别度
1. 欲分别样品
2. 柱内径
3. 固定相
4. 柱长
5. 膜厚或填充剂 %量
A. 柱容量
B. 保留实力
C. 惰性
D. 柱效
E. 流失
柱选择方面的考虑
先试手边的柱子
向同事询问
查询已发表的相像应用
假如难以确定，先用一个非极性柱，如 HP1或 HP5
这只是一些好的开端，而操作者必需自行优化条件。
柱选择
色谱