文档介绍：酶标仪的使用
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主要内容
一、ELISA法介绍
二、酶标仪和多功能酶标仪
三、仪器操作
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一、ELISA法介绍
经典的化学分析方法（如滴定分析、重量分析、分光光度法）能学、生物化学、免疫学、微生物学、药理学、环境学等方面密切相关。
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举例
医学方面：肿瘤研究中检测甲胎蛋白；检测过敏原；检测血清中白蛋白及免疫球蛋白；传染病诊断中检查乙型肝炎表面抗原。
环境科学方面：测定污染物抗原干预下生长因子、细胞因子、酶的变化。
其他：植物组织浆液中检查植物病毒；普通比色分析。
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二、酶标仪和多功能酶标仪
普通酶标仪
多功能酶标仪
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即酶联免疫检测仪(ELISA Reader）
Bio-Rad
Model 550
4万元
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光源
光电检测器
电信号经前置放大、对数放大、模数转换等
滤光片
或单色器
酶标仪结构及原理
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光源：钨灯
滤光片：常用的波长范围：
405nm
450nm(四甲基联苯胺)
490nm(邻苯二胺)
630nm
单色器：可调节波长的光
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比色装置：
聚苯乙烯塑料微孔板：96孔
光电检测器
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酶标仪与光度计的区别
波长：4-6个
比色装置：酶标板，非比色杯
光路：垂直
功能：不能波长扫描；只在固定波长的可见光范围测定；可对化学物及生命组分进行终点分析。
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酶标仪的应用
普通酶标仪基本功能有2个：
（1）相当于分光光度计：测定化合物含量或者细胞存活率等。
（2）基于免疫反应的ELISA分析。
新型的多功能酶标仪价格在20-50万元，分析功能得到广泛拓展，这对酶标仪的应用有深刻的意义。
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ELISA的局限性
世界卫生组织专家组提出对ELISA的评价认为：“ELISA作为免疫诊断应用是一个好办法，但要做好它不容易。”
，因此，对出现一些非特异性反应的时候，往往不易解释。
，主要是原料及制备工艺还不一致，致使不同批号的固相载体有时本底值较高，有时吸附性能很差，影响试验结果。
，现在处于“八仙过海，各显神通”，标准还不能统一。
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Thermo公司全波长多功能酶标仪
50多万元
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多功能酶标仪的特点
（6、12、24、48、96和384孔微孔板）,测样量大；
2. 200-1000 nm ，有紫外可见光、荧光、偏振光等,波长变化可达到1nm, 只要是有色溶液即可测定吸光度；
、动力学、单孔扫描和光谱扫描等测读模式；
。
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多功能酶标仪的实验应用举例
DNA/RNA定量和纯度检测
Bradford /Lowry实验
细胞活性/细胞毒性检测
MTT分析（IC50/LD50 ）
细菌生长分析
钙流检测
膜电位检测
双荧光素酶报告基因分析
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多功能酶标仪的实验应用
ATP检测
微生物生长
绿荧光蛋白分析
药代毒性分析
膜渗透分析
荧光偏振分析
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三、酶标仪操作
1. 注意事项
2. 酶标板
3. 操作要点
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1）反复研读试剂盒说明，熟悉操作步骤。
2）加样的准确性。操作中须注意显色剂和终止的加量准确，最好使用加样枪加液以保证比色时吸光度的准确性。枪头不要混用。
3）洗涤时间。一般按照说明书要求，起码洗涤5次，切要把残液甩干。
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4）观察和判读吸光度结果应在15min 内完成，否则液体颜色会减退。
5）待测生物样品要放在4℃冰浴上。
6）显色液要现用现配，避光低温保存。
7）注意购买抗体的保存。
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酶标板材料
可溶性抗原或抗体吸附于固相载体而成为不溶形式，这是进行酶标记测定的基本条件。许多物质可作为固相载体，如纤维