文档介绍：PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳
刘琳1131428环境科学
一、实验目的
学****并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。
对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶电泳试验，并分析相应结果。
二、实验原理
PCR扩增
多聚酶链反应（PC
2分别向9个薄壁管中分别加入24 ul的反应体系，并分别添加8 种不同的模版，并于第9个薄壁管中加入无菌ddHzO作为阴性对照。
，按照预定程序进行PCR扩增。其中循环过程需要达到30~40次。程序如下：
预变性：
94 °C
3min
循环：
94 °C
变性30s
55°C
退火30s
72°C 延伸 30s
末次延伸：72°C 5min
PCR扩增完成后，将样品取出并保存于15°C环境中。
DNA琼脂糖凝胶电泳实验
1称取0. 2g琼脂糖粉末，放到一锥形瓶中，电泳缓冲液。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。摇匀，待冷却至60°C左右，在胶液内加入适量的EB。
2取有机玻璃制胶板槽，在一端插好梳子，在槽内缓慢倒入已冷至 60°C左右的胶液，使之形成均匀水平的胶面。
2. 3待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。，至液面覆盖过胶面。取lul 缓冲液和5 待测DNA样品混合后，用移液枪滴加至凝胶的加样孔中。
2. 5接通电泳仪和电泳槽，并接通电源，调节稳压输出，电压最高不超过5V/cm,开始电泳。点样端放阴极端。根据经验调节电压使分带清晰。
（蓝色）的移动。当其移动至距胶板前沿约1cm 处，可停止电泳。
***仪的样品台上重新铺上一张保鲜膜，赶去气泡平铺，然后把凝胶放在上面。关上样品室外门，打开紫外灯，通过观察孔进行观察。
五、实验结果与讨论
如图所示：从左至右，分别是模版1-8号，第9列为阴性对照。
前8列均有明显的条带出现，而阴性对照无显示，说明扩增整体效果很好。图中有上下两条线，上面一条线所覆盖的条带基本可以代表扩增的产生的片段位置，参照图可以看出扩增片段在200bp左右。在第9个阴性对照的第二条线处可以看到较为模糊的条带，并非是出现假阴性，而是由于二聚物而产生的条带。通过该条带与最右侧的marker对比可知该片段出现在lOObp左右，并非由于实验操作等问题而产生的污染。
实验的照片显示实验结果有拖尾现象，但是并不影响后续实验。在实验过程中由于有些试剂加到了管壁上面，并没有完全加入，可能会出现一些误差。另外在第1列条带中出现了其他的亮带，可能是由于在前期的扩增实验中滴加试剂时由于量过少而进行的摇匀和融合等操作产生了非特异性扩增，也有可能是因为胶板制作过程中梳子的位置不合适或者胶板制作时边缘处不够均匀导致产生污染。但总体而言，实验结果较为满意。
六、实验注意事项
由于PCR技术非常敏感，可使一个DNA分子得以扩增，装有
PCR试剂的离心管打开之前，应先在微量离心机上作瞬间离心使液体沉积于管底。PCR扩增反应的条件，要控制好温度、时间和循环次数。
最好在加完所有其它反应成分后才加模板DNAo
配琼脂糖时应使其完全溶化后方可制胶。
EB具有致癌作