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培养基模拟灌装试验
无菌的概念
什么是无菌?
理论上：无菌＝没有任何活的微生物
实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在
无菌的概念
无菌的实灭菌;需要考虑生物负荷。
3、从除菌过滤后面开始：只考察灌封等操作过程;培养基需要事先灭菌。
关键因素二: 试验的次数和频率
培养基模拟试验的初始验证;至少需要成功的连续进行 3 次独立的模拟试验建议在不同的工作日进行试验。
首次验证后;培养基模拟试验通常每年进行2次;每次进行1批即可。
当生产线发生变更;并且经过评估可能对无菌生产工艺有潜在危险时;应当进行额外的培养基灌装试验。
关键因素三: 培养基及培养条件 1/3
培养基必须适应广谱微生物的生长;包括需氧菌、酵母菌和霉菌非选择性培养基。
较好的澄明度;较小的粘度;易于除菌过滤。
推荐使用大豆消化酪素琼脂培养基SCD ;以及大豆胰蛋白胨肉汤TSB。
如果产品在缺氧条件、通常在氮气保护下灌装时;或在环境中分离出厌氧菌时;可能需要使用厌氧培养基:液体硫乙醇酸盐培养基FTM。
关键因素三: 培养基及培养条件 2/3
培养基必须做促生长试验;按药典方法10版药典新规定进行评价。有条件的推荐使用1~2种最常见的环境分离菌。
促生长试验可以同步或14天培养后进行。用于促生长试验的培养基培养前需经过同样的工艺步骤例如清洗、灭菌、充氮、灌装、冻干等
通常情况;在培养结束后;一些玻璃瓶从生产开始、中间、结束时取样进行微生物接种。
关键因素三: 培养基及培养条件 3/3
培养温度
全部样品应在20-35℃±2。5℃下培养14天。通常在 20-25℃下培养 7 天;然后在30-35℃下培养 7 天；或者在30-35℃培养 7 天后;再转移到 20-25℃培养 7 天。
原则：选择的温度适宜那些从环境中分离的微生物或生物负荷中的微生物的培养。
关于培养条件的选择;补充一个没有形成共识的建议;在培养过程的前半个周期;将所有产品进行倒置后培养；然后在剩余时间内;将产品恢复直立位置后进行培养。
关键因素四: 灌装数量
灌装的数量应该能够真实的反应批量；但允许根据需要;采取最低灌装数量;前提是应足以反应操作员工疲劳时对产品质量潜在的影响 ;并且足以体现了尽可能发生的干预措施。
一般生产量小于5000;培养基灌装数量应等同批量；生产量大于5000时;培养基最小灌装数量不少于5000。
一些法规中建议应该根据批量确定灌装的数量。
关键因素五: 容器体积1/2
应该考虑到灌装容器的极端尺寸。
最大的容器通常由于充填体积较大而导致最小的充填速度通常开口较大;所以从环境中微生物侵入的潜在风险是最大的。
最小的容器通常由于充填体积较小而导致最大的充填速度体现了最大的操作难度；小的容器更容易破碎;稳定性差;在设备中更容易破裂或堵塞。
关键因素五: 容器体积2/2
在最初的验证中;可以二次选用最大的容器配合一次最慢、一次最快的灌装速度;第三次选用最小的容器配合最快的灌装速度。
在每年2次的再验证中;用其它规格尺寸的容器轮转试验。
不能使用琥珀色的容器;而应该使用透明的容器;保证可以目视检测到微生物的生长。
关键因素六: 灌装体积
培养基灌装体积不需要与现实中常规的灌装体积一致。可能因为模拟装量调节过程;使有包含不一致的培养基装量
应确定足够的灌装体积;保证可以充分接触到容器和密封部位的表面当它倒置和旋转时;并且足以目视检测到微生物在培养后的生长情况。
较小的容器不能灌装的太满;因为容器上部的空间中应保持足够的空气;以支持需氧微生物的生长通常应该保留25%的空间。
关键因素七: 灌装速度
培养基灌装的速度;应符合实际生产的灌装速度范围。如果超过了限度;应该进行评估。
每次模拟试验中确定的速度应该是符合要求的。
较高的生产速度;可以适用于生产过程中经常受到干扰或手工操作较多的生产工艺。
较低的生产速度;可以应用于在无菌区域中无菌部件长时间暴露的生产工艺。
在灌装生产线的起始验证中;一次可以选用最低速度;另外二次可以选用最高速度。
在生产线的每年2次的再验证中;模拟试验的速度应该进行变换。
关键因素八:灌装的持续时间
通常情况;培养基灌装的时间应该足够长;能够包括所有的必需的干扰、生产中断;包括正常的无菌操作如开始前的安装、重量或体积的调整、改变设备或手动维修等;还包括更衣、暂停、换班等;持续时间还应能反映出潜在的人员疲劳。
对于非常大的批量或较长的生产过程;通常使用一些空白样品空的或者灌水以维持模拟试验的动态环境。这些技术可以应用于持续多个工作日的工艺验证;用于验证可以批准的最长的生产周期。
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