文档介绍：凝胶层析法分离纯化蛋白质
【目的】
掌握凝胶层析的基本原理
学习利用凝胶层析法分离纯化蛋白质的实验技能
【原理】
凝胶层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离的技术。
凝胶层析是按照蛋白质分子量大小进行分离的技术,又称之凝胶过滤、分子筛层析或排阻层析。
单个凝胶珠本身象“筛子”。不同类型凝胶的筛孔的大小不同。
凝胶过滤层析
带网孔的葡聚糖珠
小分子进入葡聚糖珠内
大分子不能进入珠内,经珠之间缝隙流出
凝胶过滤层析过程示意图
凝胶过滤层析过程示意图
小分子
大分子
凝胶基质
凝胶珠
总结:
相对分子质量较大的物质由于直径大于凝胶网孔被完全排阻在孔外,只能在凝胶颗粒外的空间向下流动,因此流程较短,移动速度快;所以首先流出。
相对分子质量较小的物质由于直径小于凝胶网孔,可完全渗透进入凝胶颗粒的网孔,在向下移动过程中,因此流程较长,移动速率慢;所以最后流出。
中等大小的分子,它们在凝胶颗粒内外部分渗透,渗透的程度取决于它们分子的大小,所以它们流出的时间介于二者之间,这样分子大的组分先流出,分子小的组分后流出。这样样品经过凝胶层析后,各个组分便按分子从大到小的顺序依次流出,从而达到了分离的目的。
【实验器材】
层析柱
恒流泵
紫外检测仪
部分收集器
试管等普通玻璃器皿