文档介绍：实验九:聚丙烯酰胺凝胶电泳法 分离血清蛋白质
教师:王丽华
实验目的
1、熟悉电泳的基本原理
2、掌握PAGE的基本原理与操作技术
具体安排
上午:制胶、原理讲解
中午:电泳(午餐)
下午:染色,脱色、观察结果
电泳的基本原理
电泳:
是指带电粒子在电场中向着与其所带相反电荷的电极方向移动的现象。
应用:
蛋白质、核酸和氨基酸等物质的分离和鉴定。
带电粒子的运动速度----迁移率μ
即带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。
μ= Q X /6πrη
Q 粒子所带电荷量
X 电场强度
r 粒子半径
η介质的粘度
影响电泳速度的因素
1、内在因素: 样品自身性质
2、外在因素: 电场
缓冲液
支持介质
a. 电荷
b. 分子大小
c. 形状
v=QX/6πrη
内因:待分离大分子的性质
电场(三要素)
电流: μ与电流成正比
电压: μ与电压成正比
常压电泳(100-500V)
高压电泳(500-10000V)
电阻: μ与电阻成反比
缓冲液
pH:
为电泳提供了恒定的pH值和适宜的离子强度
解离性质
解离程度
运动方向
电荷量
-
离子强度:
强度过低,缓冲能力差,难以维持pH恒定,同
时样品扩散严重;
强度过高,减缓样品的迁移率。
支持介质(物)
吸附:支持介质对样品的滞留作用,可导致样品的拖尾。
电渗:在电场中液体对固体支持物的相对移动。
当电渗方向与电泳方向一致时,会加快颗粒泳动
速度;反之,当两者方向相反时,会减慢颗粒泳
动速度。
分子筛:是凝胶电泳的一个特性。筛孔越小,则颗粒在
移动的过程中所受到的阻力也就越大。