文档介绍：基因分子生物学实验报告实验名称: RNA 的制备、鉴定及 RT-PCR 实验类型: 验证型□综合型√设计型□实验室名称: 分子细胞遗传实验室指 导教师: ?? ? ???____________ 王 欣______________________ 班级: 周二组别: 3 姓名: 姜仁涛学号: S2011008044 成绩: 实验起始日期: 2012-2-28 基因分子生物学实验 1 SIGMA 高速冷冻离心机 2K15 SANYO 制冰机 SIM-T-124 高压消毒锅 YX-280 Biometra PCR 仪 T-1 恒温水浴箱通达涡旋振荡仪 TDX-1 Tanno 凝胶成像仪 Gis-2010 一恒恒温干燥箱 DHG-9070A DYY-6C 型电泳仪 Eppendorf 生物分光光度计 AG22331 二. 实验材料 HEK293 细胞 Trizol 试剂***仿异丙醇无Rn ase 水 75% 乙醇(无水乙醇 75ml , DEPC 水或高压灭菌双蒸水 25ml ) 10* 上样缓冲液( 聚蔗糖 或 40% 聚蔗糖: 5ml , 溴酚蓝 25mg , 二甲苯青 25mg , EDTA 20ul , DEPC 水 10ml ) 10mg/ml EB ( EB , DEPC 水 10ml ) 琼脂糖 1*TAE GAPDH 上下游引物 TRANS TM 第一链 cDNA 合成试剂盒( EasyScriptRT/RI Enzyme Mix , 2*ES Reaction Mix , Random Primer , Anchored Oligo ( dT ) 18 Primer ,Rn ase-free water ) RNA 提取 1)观察培养细胞, 10cm 平板内约 80% 密度,生长良好;吸尽培养液后, 立即将 Trizol 直接加入培养板中裂解细胞,不断摇动。每 10cm 2 面积加入 1mlTrizol 。用一次性针管,吹吸几次,转移到一 EP 管中,室温静置 5分钟。 2 )加 ***仿,剧烈震荡 15 秒,室温静置 3 分钟。 12 000rpm 4℃离心15分钟。 3 )将上层水相转移到另一 EP 管中,加入 500ul 异丙醇,混匀,室温静置 20-30 分钟; 10 000rpm 4℃离心 10分钟,弃上清。 4)加入 1ml75% 乙醇( DEPC 处理的水配制), 剧烈涡旋洗涤沉淀(将沉淀击碎), 6000rpm 4℃离心 5 分钟,弃上清,室温晾干沉淀(大约 5 分钟左右)。5) RNA 的溶解:用 100ul 无Rn ase 水溶解沉淀。 55-60 ℃孵育 10分钟, 分装样品,(30,30