文档介绍：摘要：本文主要介绍了大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法.
第一天：
将适合菌株（如XL1-Blue, DH5a）置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37° C下过夜培 养
高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用
摘要：本文主要介绍了大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法.
第一天：
将适合菌株（如XL1-Blue, DH5a）置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37° C下过夜培 养
高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用
准备几瓶灭菌水（），保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用 第二天
-1ml过夜培养物至装有500ml LB（或其他营养丰富的培养基）的1-2升摇瓶
37° C下剧烈振荡培养2-6小时
定时监控OD600值（培养1小时后每半小时测定一次）
-，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少15分钟（需要的话这种 方式可以存放培养液数小时）
细胞在4° C 5000g下离心15分钟，弃上清液（如需要，沉淀可在4° C的10%甘油中保存 一两天）
（几毫升）,然后 加水稀释至离心管的2/3体积.
照上面步骤重复离心，小心弃去上清液
照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞
离心，弃上清液
用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞
照上面步骤离心，小心弃去上清液（沉淀可能会很松散）
用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-3ml
将细胞按150p l等份装入微量离心管，于-80° C保存
转化方法：
在冰上解冻电感受态细胞添加1-10p l DNA，冰上培育约5分钟
添加1-3p l DNA,冰上培育约5分钟
转移DNA/细胞混合物至冷却后的2mm电穿孔容器（无泡）中
加载 P1000，准备好 300p l LB 或 2xYT
对电穿孔容器进行脉冲（200欧姆,25p Fd,）（检查时间常数,应该在3以上）
立即添加300p l的LB或2xYT至电穿孔容器中
37° C下培养细胞40分钟至1小时以复原
转移细胞至适当的选择培养基上培养
高效率感受态细胞的制备注意要点
摘要：根据实验室的实际情况，我们将其稍作修改，做成了 GLP文件,但其中仍有许多可改进或需 要注意的地方，其中有一些对普通感受态效率的提高也有一定的帮助.
关于大肠杆菌的感受态制备及转化的方法很多，最复杂的莫过于电转化，而最简单的则是将 ，高 而稳定的感受态可减轻不少麻烦.
现在大肠杆菌转化效率最高的要数电转化，可达到1010， 单，又能有较高的转化效率,最好的莫过于1990年《Gene》上刊登的由Inoue 感受态细胞的制备与转化方法.
根据实验室的实际情况，我们将其稍作修改，做成了 GLP文件,但其中仍有许多可改进或需 要注意的地方，其中有一些对普通感受态效率的提高也有一定的帮助.
1、 ，是所有与感受态有关的方法与文章上必讲的，毋庸 置疑.
2、 ，这关