文档介绍：一种检测***霉素的蛋白制备方法
一种检测***霉素的蛋白制备方法
本发明公开了一种检测***霉素的蛋白制备方法，包括如下步骤：首先在缓冲液中加入蔗糖调制成5—25%直线型蔗糖密度梯度液，接着在蔗糖密度梯度液中加入大肠杆菌核糖体后通过超速离心机离心一种检测***霉素的蛋白制备方法
一种检测***霉素的蛋白制备方法
本发明公开了一种检测***霉素的蛋白制备方法，包括如下步骤：首先在缓冲液中加入蔗糖调制成5—25%直线型蔗糖密度梯度液，接着在蔗糖密度梯度液中加入大肠杆菌核糖体后通过超速离心机离心分离获得50S核糖体亚基，最后用磷酸盐缓冲液稀释50S核糖体亚基至2mg/ml后制备成蛋白。本发明所述的一种检测***霉素的蛋白制备方法，其是受体配体结合，而且配体容易批量获得，具有更高的灵敏度及更低的生产成本。
【专利说明】一种检测***霉素的蛋白制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种检测***霉素的蛋白制备方法。
【背景技术】
[0002]***霉素广泛应用于动物各种传染病治疗，特别是用于奶牛乳腺炎的治疗，从而易使奶制品里有***霉素残留。由于***霉素的苯环上含有硝基，对人体具有毒副作用，能抑制造血机能，因此我国农业部已经禁止使用***霉素，无论内销还是出口，***霉素残留检测都是必检项目。
[0003]***霉素类抗生素可作用于细菌核糖核蛋白体的50S亚基，而阻挠蛋白质的合成，属抑菌性广谱抗生素。细菌细胞的70S核糖体是合成蛋白质的主要细胞成分，它包括50S和30S两个亚基。***霉素通过可逆地与***霉素50S亚基结合，阻断转肽酰酶的作用，干扰带有氨基酸的***基酰-tRNA终端与50S亚基结合，从而使新肽链的形成受阻，抑制蛋白质合成。
[0004]
【发明内容】
本发明的目的在于提供一种检测***霉素的蛋白制备方法，其是受体配体结合，而且配体容易批量获得，具有更高的灵敏度及更低的生产成本。
[0005]为了达到上述目的，本发明的技术方案是:
一种检测***霉素的蛋白制备方法，包括如下步骤:首先在缓冲液中加入蔗糖调制成5—25%直线型蔗糖密度梯度液，接着在蔗糖密度梯度液中加入大肠杆菌核糖体后通过超速离心机离心分离获得50S核糖体亚基，最后用磷酸盐缓冲液稀释50S核糖体亚基至2mg/ml后制备成蛋白。
[0006]所述缓冲液由以下重量比的原材料配置而成:
；
三(羟***)氨基甲烷 10;
***化铵60。
[0007]所述5 — 25%直线型蔗糖密度梯度液依次分为蔗糖浓度为5%的溶解液，蔗糖浓度为10%的溶解液，蔗糖浓度为15%的溶解液，蔗糖浓度为20%的溶解液，蔗糖浓度为25%的溶解液。
[0008]所述超速离心机离心时离心机的转头转速为65000rpm，离心时间为45min，离心温度为4°C。
[0009]本发明的有益效果是:一种检测***霉素的蛋白制备方法，其是受体配体结合，而且配体容易批量获得，具有更高的灵敏度及更低的生产成本。
【具体实施方式】
[0010]实施例1
一种检测***霉素的蛋白制备方法，包括如下步骤:首先在缓冲液中加入蔗糖调制成5—25%直线型蔗糖密度梯度液，所述5 — 25%直线型蔗糖密度梯度液依次分为蔗糖浓度为5%的溶解液，蔗糖浓度为10%的溶解液，蔗糖浓度为15%的溶解液，蔗糖浓度为20%的