文档介绍：植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）
免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。由于酶联免疫吸附分析法（Enzym植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）
免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays,简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。
植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式，一种是在固相载体上包被抗体（直接法），另一种是包被抗原（间接法）。
直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。
间接法的原理可用下式表示：
Ab+H+HP=AbH+AbHP
其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素一蛋白质复合物。根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H 量的多少。
材料、试剂及设备
1材料
各种新鲜植物材料
2仪器设备
研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10p l，40p l,200p l,1000p l），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。
3试剂
（1）磷酸盐缓冲液（PBS）:称取 NaCl, KH2PO4 , Na2HPO4 - 12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，。
（2）样品稀释液：500 ml ml Tween-20，（稍加热溶解）。
（3）底物缓冲液：・HO （柠檬酸）， HPO - 12HO，用量筒加1 000ml
6 8 7 2 2 4 2
蒸馏水，再加 1 ml Tween-20， pH 为。
（4）洗涤液：1000ml PBS 加 1mlTween-20。
（5）终止液：2mol/L H2SO4。
（6）提取液：80%甲醇，内含1 mmol/L BHT（二叔丁基对甲苯酚，为抗氧化剂，先用甲醇溶解 BHT，再配成80%的浓度））。
操作步骤
样品中激素的提取
（1） -（若取样后材料不能马上测定，用液氮速冻半小时后，保存在 -20^的冰箱中），加2ml样品提取液，在冰浴下研磨成匀浆，转入10ml试管，再用2ml提取液分次将研钵冲洗干净，一并转入试管中，摇匀后放置在
4C冰箱中。
（2） 4C下提取4h, 3500转/min离心8min,取上清液。沉淀中加1ml提取液，搅