文档介绍：脂康对高脂血症家兔血脂及肝脏ＬＤＬ－ＲｍＲＮＡ影响的研究:高脂血症能治好吗
摘要：目的 通过建立新西兰家兔高脂血症模型，探讨肝脏低密度脂蛋白受体(LDL－R)基因水平与高脂血症形成的关系。方法 建立高脂血症家兔模麻醉，心脏取血，用于血脂项目检测。取靠近肝门静脉处的肝脏组织，直径约2 cm，用浓度10％甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，用光镜视察。另取肝脏组织，直径约1cm，用浓度4％多聚甲醛固定后做LDL－RmRNA(原位杂交)检测。 1．3 生化指标检测 分别于用药前取耳缘静脉血及用药后心脏取血10 mL，离心3000 r/min，10 min，取血清分装，－20℃冰箱保存，血清总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL－C)含量测定采纳酶法，依据Friedward公式法计算低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C)，即LDL－C＝TC－(TC/＋HDL－C)。动脉硬化指数(AlP)为TG与HDL－C摩尔浓度比值的对数。血脂检测检测试剂盒：北京中生生物工程高技术公司生产的试剂盒；LDLR ISH原位杂交试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司供应。 1．4 肝脏组织LDL－R mRNA原位杂交检测 1．4．1 试验步骤 将簇新的肝组织切成不超过4 mm的小块，并刚好用固定液固定1 h。常规脱水、浸蜡、包埋，切片厚度为(6～8)μm。石蜡切片常常规二甲苯、乙醇脱蜡，滴加H2O2室温(5～10)min以灭活内源性酶。暴露mRNA核酸片段：切片上加3％枸橼酸簇新稀释的胃蛋白酶。37℃，(12～15)min，清洗。固定，胃蛋白酶消化后在玻片上滴加固定液室温固定10 min，清洗3次。预杂交，首先将湿盒打算好，每张切片滴加20 μL预杂交液，放人湿盒内，(38～42)℃4 h，甩去多余的液体。杂交：在每张玻片上滴加20μL杂交液，将原位杂交专用盖玻片的爱护膜揭开后，盖在切片上。放恒温箱杂交过夜。杂交后洗涤。滴加封闭液：放入37℃30 min后取出，甩去多余液体，不洗。滴加生物素化鼠抗***，放入37℃60 min，PBS洗涤。滴加SABC；放入37℃30 min，PBS洗涤。滴加生物素化过氧化物酶，37℃恒温箱中放置30min，PBS洗涤。DAB显色，运用DAB显色试剂盒，滴至玻片上，显色(30～50)min，充分水洗，苏木精复染，充分水洗，酒精脱水，二甲苯透亮，封固。 1．4．2 原位杂交试验结果判定 光学显微镜下视察结果的判定标准：原位杂交结果以细胞浆内或核膜上出现棕黄色颗粒者或斑片为阳性细胞。 1．4．3 分析方法 计算机图像分析，在图像卡IBM586和OlympusBX60显微镜组成的图像处理系统上，测定阳性细胞数：每组每只大鼠各5个高倍视野(10×40)下原位杂交阳性细胞率(％)。 1．5 统计学处理 计量资料采纳单因素方差分析(F检验)，结果用均数±标准差(x±s)表示。用SPSS 。 2 结 果 2．1 血脂水平改变 本试验结果提示脂康高剂量组对高脂血症家兔血清TC，TG，LDL－C水平有显著的降低作用(P＜)，对HDL－C有显著上升作用(P＜)。脂康高剂量与西药辛伐他汀比照组比较，在降低家兔血清TC，TG，LDL－