文档介绍：黄***标准曲线绘制的实验报告 1. 总黄***的测定 1 .1 实验仪器电子天平 AR2140; 紫外可见分光光度计 UV2754; 型数控超声波清洗器 KQ3200DB ; 超级恒温槽;Rotavapor R200 旋转蒸发仪; FD21C250冷冻干燥机 2 试剂及药品芦丁标准品***铝国产分析纯(配成 5%) 亚***钠国产分析纯(配成 10%) 氢氧化钠国产分析纯配成(配成 1mol/L ) 95% 乙醇,无水乙醇国产分析纯(配成 60% 乙醇 50% 乙醇) DPPH ·(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl ,二苯代苦味肼基自由基) Vc(Ascrobic acid ,维生素 C,抗坏血酸) 没食子酸对照品:基准纯。大青叶子采摘于海南大学东坡湖畔实验步骤: 准备工作及波长的确定样品 60℃烘干粉碎机粉碎,过20目筛,装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄***在波长为 510nm 处吸收值最大。参照品芦丁标准溶液的制备精密称取 120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品置于 100mL 烧杯中,用 60%乙醇溶解后定容至 25mL 容量瓶中,摇匀,即可得的芦丁标准溶液。标准品的测量及绘制标准曲线精密吸取芦丁标准溶液、、、、、、 mL,分别置于 10mL 容量瓶中,并定容至刻度线。得到、、、、、、的标准品溶液,分别取 1ml 到试管中各加 5%亚***钠溶液 mL摇匀,放置 6min ,加10% ***铝溶液 mL摇匀,放置 6min ,加1mol /L氢氧化钠溶液 4mL,再用 60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min 后,分别在 510nm 处测定其吸光度(Tai,Cai&Dai,2011 )。(以试剂空白做参比) 以吸光度 A 为纵坐标, 浓度 c 为横坐标, 绘制标准曲线。用最小二乘法进行线性拟合,得c与A的线性回归方程以及相关系数 R 2。序号浓度( ug/ml )吸光度 100 表1-1 :芦丁标准曲线测定数据图 1-2 :芦丁标准曲线样品的测试根据查阅文献总黄***在波长为 510nm 处吸收值最大。取黄***提取液, 取提液2ml 至10ml 的比色管中用 60% 的乙醇定容至刻度线则稀释 5 倍。取稀释好的溶液 4份1ml 置入 10ml 的比色管中,其中一份用 60% 的乙醇定容,作为参比溶液。其余各份各加 5% 亚***钠溶液 mL 摇匀, 放置 6min ,加10% ***铝溶液 mL摇匀,放置 6min ,加1mol 氢氧化钠溶液 4mL,再用 60%乙醇溶液稀释至刻度,放置 15min 后,分别在 510nm处测定其吸光度。代入标准曲线回归方程可得浓度数据(以芦丁为参比) ,三次结果取平均值。经换算后得样品中总黄***含量。样品总黄***含量(mg/g)=X*n*V 1/(V*W) 式中: X—测出的浓度, mg/ mL; (直接代入,不用换算。) n—稀释倍数,量纲为 1; V I—样液总体积, mL; V—测定时取样体积, mL; W—样品质量, g。 2. 总分含量的测定实验仪器 ALZO4 型电子分析天平:上海梅特勒一托利多仪器有限公司; DELA 犯O型pH计:上海梅特勒一托利多仪器有限公司; 723 可见分光光度计:上海菩华科技仪器有限公司; DK一512 型电热恒温水浴锅:上海森信实验仪器有限公司; 容量瓶(250mL ,10OmL ,25mL) 、比色管管(10mL); 烧杯、移液管、吸耳球。试剂及药品没食子酸对照品:基准纯,购于上海分析试剂厂,置 50℃真空干燥箱真空中干燥 4h。乙醇为工业级,蒸馏水,其他试剂均为分析纯。 2 .3 Folin — Ciocalteu 比色法测定总酚酸含量 Folin —Ciocalteu 试剂的配制称取 20g钨酸钠和 5g钼酸钠于圆底烧瓶中,用140 ml蒸馏水溶解,加入 10ml 85%的磷酸溶液和 20ml浓盐酸,文火回流 10h,然后加入 3g硫酸锂及 15ml双氧水,加热沸腾 15min 至亮黄色,不得带微蓝和绿色。冷却,移入 250ml容量瓶中,定容,贮于棕色瓶中, 4℃冰箱保存。对照品溶液制备准确称取 ,加蒸馏水适量,超声溶解,放冷,以蒸馏水定容至 50ml