文档介绍：1 同型半胱氨酸的测定及临床应用【关键词】同型半胱氨酸近年来,关于心血管疾病危险度的指标研究取得很大进展,公认的主要危险因素: 吸烟、高血压、高胆固醇、肥胖和糖尿病等, 载脂蛋白及脂蛋白(a) 在临床应用也十分广泛。最近,又有一个新的独立的心血管疾病危险指标―――同型半胱氨酸 homocystEine , HCY ) 受到重视和关注,本文对其理化性质、检测方法及临床应用作一综述。 1 HCY 理化性质同型半胱氨酸为一种含硫氨基酸, 是蛋氨酸代谢过程中的重要中间产物。同型半胱氨酸于 193 2年由 De Vgneau d 发现, 其结构式为 HSCH 2( NH 2) CO 2H。血浆中存在氧化型和还原型 HCY 两种形式[1], 氧化型含二硫基, 包括同型胱氨酸和胱氨酸; 还原型含硫基, 包括同型半胱氨酸及半胱氨酸。正常机体存在少量同型半胱氨酸,还原型仅占 2% 。 HCY 转化的主要途径有两条:(1) ***化过程, 即通过叶酸循环途径,有***四氢叶酸作为***供体, VitB 12 作为辅 2 因子, 在蛋氨酸合成酶的催化下形成 L- 蛋氨酸。叶酸循环中的限速酶为 5, 10- ***四氢叶酸还原酶。(2 )转硫过程,由 VitB 6 依赖的胱硫醚β合成酶催化完成,代谢产物进入三羧酸循环或由尿排出[2]。自 20 世纪 60 年代初在尿中首次被发现以来, 同型半胱氨酸被认为与多种先天性代谢缺陷疾病有关,如胱硫醚β合成酶缺乏造成高同型半胱氨酸尿症。近年来发现***四氢叶酸还原酶基因突变后形成的热不稳定型表型与同型半胱氨酸水平升高相关联, 这一基因有可能作为同型半胱氨酸血症遗传学检查的主要基因型。 2 HCY 实验室检测方法最早检测同型半胱氨酸是氨基酸分析法, Ueland 等测定血清中同型半胱氨酸, 后经改良, 目前常用方法包括以下几种。同位素法由 Refsum 等[3] 1985 年建立的方法。该方法通过 14C 标记的腺苷与 HCY 缩合后,经色谱分离,液体闪烁计数放射强度来测 HCY 浓度。该方法灵敏度高,特异性强,但操作繁琐且有放射污染,未能推广使用。 3 色谱法 1987 年 Stabler [3] 首先报道了气相色谱―――质谱法测定同型半胱氨酸。该法可同时测定半胱氨酸、蛋氨酸、胱硫醚和***甘氨酸等多种物质。虽然灵敏度、特异性好,但仪器价格昂贵而不能推广。高效液相色谱法( HPLC )是目前比较成熟且推广使用的方法,不足之处是样品处理、层析条件、样品检测及定量的诸多变异, 使其难以标准化。 Fiskertrand [4] 等首先于 1993 年用全自动高效液相色谱法对血浆和尿液的 HCY 和硫醇物进行测定。 HPLC 根据衍生方式(柱前或柱后衍生) 、检测方法(荧光、电化学) 可分为多种方法。应用 HPLC 准确测定同型半胱氨酸需要优良的设备、高超的技术经验和应用 HPLC 方法适当的时间,另外选择和制备内部质控也相当重要。免疫学法该法应用特异性的抗 S- 腺苷同型半胱氨酸单克隆技术, 采用荧光偏振法或免疫法测定 HCY 。美国雅培公司采用全自动荧光偏振免疫技术[5] ,用 AXSYM 仪器检测 HCY ,反应原理为: 正常人血浆中 HCY 约 1% 以还原型存在, 70% 与白蛋白结合, 30% 形成小分子二硫化物。