文档介绍：贻贝SOD纯化方法的
THE GRADUATION POWERPOINT TEMPLATE
2021
答辩：
导师：T
实验方法
采用热变性，硫酸铵分级沉淀进行粗酶液的提取。
采用两种柱层析方法—SephadexG-100单贻贝SOD纯化方法的
THE GRADUATION POWERPOINT TEMPLATE
2021
答辩：
导师：T
实验方法
采用热变性，硫酸铵分级沉淀进行粗酶液的提取。
采用两种柱层析方法—SephadexG-100单次柱层析；DEAE-SephadexA-50和SephadexG-100两次柱层析的方法从贻贝中分离纯化超氧化物歧化酶。
实验结果
G-100柱层析收集液在280nm（系列1）和酶活力（系列2）图
实验结果
A-50柱层析收集液在280nm（系列1）和酶活力（系列2）图
实验结果
两次柱层析后收集液在280nm（系列1）和酶活力（系列2）图
结论与分析
操作步骤
酶活力
(u)
蛋白
浓度
(mg/ml)
比活力(u/mg)
纯化倍数
粗酶液
1
G-100
A-50
两次柱层析
实验结果
电泳结果如图
分析
从只经过G-100柱层析的收集液与经过两次柱层析收集液的比活力的比较可以看出，只经过G-100柱层析的收集液的提纯效果要好。可能是因为粗酶液经过A-50柱层析后并未立即进行第二次G-100柱层析，由于经过A-50提纯后的酶液浓度变小，低浓度酶液储存时易于解离、吸附或发生表面变性失效],使得部分酶失活，再经过第二次柱层析酶活力下降。
从贻贝SOD的非变性聚丙烯酞胺凝胶电泳的NBT活性染色图谱可以看出A-50和粗酶液均共有四条带，G-100和两次柱层析后的酶液均有三条带。因SOD具有抑制NBT光化还原的作用，故说明均属SOD。由于SOD在一定环境下可呈现不同聚合度，不同聚合度的SOD可能带不同电荷，所以SOD经PAGE呈现多条电泳带。另外，SOD结构松驰，无规卷曲较多，易发生构象改变，不同构象分子会呈现不同电泳谱带。
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