文档介绍：核酸检测基本知识
.什么是核酸检测
核酸的定义：核酸是由核昔酸或脱氧核昔酸通过 3',
5'-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。
Decxyriboie tug#
Phtnphaie group
Kvdrcoeri f提取病毒 RNA 加入AM诬转录酶、 RNA! H、T7RNA1合酶和引物进行扩增。整个反应分非循环相和循环相：在非循环相中，引物I
与模板RNA1火后在AM诬转录酶的作用下合成 cDNA,形成
RNA DN原合体，随即RNaseH条解RNA引物n与cDNA1火，在反转录酶作用下合成第 2条DNAT补链。双链 DNAT在
T7RNA1合酶的彳^用下，经其启动子序列起动而转录 RNA
RN双可在反转录酶的作用下反转录成 DNA,进入循环相，对
模板进行大量扩增。
bo转录介导的扩增技术
TM股术原理与NASBAI本一致，略有不同之处是 TM保I」用的是MML逆转录酶及T7RNA1合酶两种酶， MML辿转录酶既有逆转录酶的活性又具有 RNA8H活性。反应在41 o 5 c进行，可在1h内将RNA!板扩增约109倍。
Co连接酶酶促链式反应（LCR）
LC幅基于靶分子依赖的寡核昔酸探针相互连接的一种
探针扩增技术，是继 PC丽新发展的一种较有前景的体外扩
增技术。它的原理就是由 2段寡核昔酸单链 DN麻针与目标序列杂交，当该 2段DN麻针与没有发生突变的模板褪火后，如果2探针是紧邻的，中间没有核甘酸间隔，则可在连
接酶作用下连接起来，连接以后的新链又可以作为模板，引
导下一周期的连接产生新的子链。若连接区段发生核甘酸的碱基突变，则连接反应不能发生，扩增反应终止。
（PCR
PC破术的基本原理类似于 DNA勺天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核昔酸引物。 PCFfc变性
一退火一延伸三个基本反应步骤构成。
①模板DNA勺变性：模板 DN恪加热至93 c左右一定时间后，使模板DN破链或经PCIT增形成的双链 DN廨离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。
②模板DNAI引物白^退火（复性）：模板DN解加热变性成单链后，温度降至55c左右，引物与模板 DN脖链的互补序列配对结合。
③引物的延伸：DNA模板一引物2合物在 TaqDN麋合酶的作用下，以dNTF%反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成 1条新的与模板DNA1互补的半保留复制链，重复循环变性一退火一延伸三过程，就可获得更
多的“半保留复制链",而且这种新链又可成为下次循环的
模板。每完成1个循环需2〜4min, 2~3h就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。检测 HIV RNA,需要先利用逆转录反应将RNA专录为cDNA,继而以cDN的模板进行PCfT增即可，这样的反应称为R1R PCR
e。实时荧光定量 PC或术
实时荧光定量PC股术，是指在PC双应体系中加入荧光基团，利用荧光信号实时监测整个 PCR®程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
本技术的原理是使用荧光基团标记探针，5 '端标记荧
光基团R, 3'端标记淬灭基团 Q,在没有PCRT增时，由于荧光基团和淬灭基团空间距离很近，使