文档介绍：实验五酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
【目的要求】
了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。【基本原理】
酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。的核酸，,在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。
1．嘌呤碱取水解液1mL加入过量浓氨水，***银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。
2•核糖取1支试管加入水解液1mL、三***。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。
3．磷酸取1支试管，加入水解液1mL和定磷试剂1mLo在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。
【实验报告】
思考题
1、如何得到高产量RNA的粗制品?
2、本实验RNA组分是什么?怎样验证的?【注意事项】
从酵母中提取核酸部分可由两个学生共做一份。水解及组分鉴定部分由每个学生独立操作。
实验十五、薄层层析技术
要求掌握薄层层析的原理和方法。
应用DEAE-纤维素薄层层析分离鉴定核苷酸。
原理
二乙氨基乙基纤维素，简称DEAE-纤维素，是弱碱性阴离子交换剂，在pH3・5左右（2N—）解离成＞NHC1-季***型，带负电荷的核苷酸离子可被交换上去。利用各种核苷酸的结构不同，因而和DEAE-纤维素亲和力的大小不同，来达到分离的目的。
器材
•布氏
漏斗或离心机
（）
管
6．恒
5．吹风机
温箱
7．托盘天平8．紫
外分析灯（波长254nm）
试剂
1．1mo1／L盐酸溶液200mL（每二人10nL）
2・pH3・5,-柠檬酸钠缓冲液1000mL（每二人30nL）
称取柠檬酸•,柠檬酸钠・,溶解在2000mL水中，。
3．标准核苷酸各5mL
10mg/mL的AMP、ADP和ATP溶液
4．混合核苷酸5mL
AMP+ADP+ATP（均为10mg/mL）
5．DEAE-纤维素40g
（每二人1g）
操作
1・DEAE-纤维素的预处理用4倍体积的水将DEAE-
纤维素浸泡过夜,离心或抽干。再用1mo1/L的盐酸溶液浸泡4小时（）。用水洗至中性或在60°C以下烘干备用。
2•铺板用水把经过预处理的DEAE-纤维素在烧杯里调成糊状，立即倒入干净的玻璃板上。轻轻摇动玻璃板，使纤维素铺成均匀的薄层或将糊状物倒至涂布器的槽内，用涂布器将纤维素涂成薄层（）。将玻璃板先放在水平桌面上静置片刻，再放人60C烘箱内烘干备用。
3•点样在距DEAE-纤维素板一端2cm处用铅笔轻轻划一横线，在横线中央用毛细管点样（见下图）。每次点样后用冷风吹干，每种样品点2〜3次。
。
4．（约30mL）。把点过样的薄板倾斜插入此烧杯内（点样端在下），溶液由下而上流动，当溶剂前沿到达距薄板上端约1cm处时（25分钟左右），取出薄板，用热风吹干，用A254nm的紫外灯照射DEAE-纤维