文档介绍：多糖类药物的毛细管电泳分析及应用
汇报人:吴涛
一、前言
高效毛细管电泳(HPCE)是20世纪80年代发展起来的一种分离分析技术,它以快速、高效和灵敏度高、所需样品少等优点被广泛应用于各个领域。用毛细管电泳分析糖类物质在20世纪90年代发展迅速,但目前毛细管电泳对糖的分析主要集中在单糖和寡糖的分离检测方面,对多糖的分离分析还不多见,本文将结合实验介绍毛细管电泳对多糖中的单糖组份分析。
二、毛细管电泳分析多糖中单糖组份的步骤
多糖样品的水解混合标准单糖
衍生衍生
上机检测

样品单糖组成图谱混合标准单糖图谱
对照
三、影响分离的关键因素

电泳的各种条件,如电压、电流、环境温度、进样量、毛细管长度和内径等都对分离有影响。但当上述条件固定后影响单糖分离能力的关键因素主要是缓冲液的PH值和浓度。
PH值及硼砂和硼酸缓冲液的选择
目的:使单糖在较低的PH值下带上电荷,实现电泳迁移
硼酸缓冲液:PH3~,然后随着PH值上升而下
降,PH5前后分离度为零,PH值继续升高分离度又
增加,但出峰顺序改变。适用于酸性条件。
硼砂缓冲液:~,PH值继续升高,分离度下降,出峰
变慢。在碱性条件下,PH值相同时硼砂优于硼酸缓冲液
缓冲液的浓度
增加缓冲液的浓度,能比较有效的增加分离度,但单糖出峰时间延长,电泳电流增大,导致基线噪音和漂移增加,峰高下降。适合的缓冲盐浓度为25~100mmol/L 之间
7种标准单糖混合图谱
出峰顺序及时间:1. 鼠李糖 Rha:’; Xyl: ’; Glu: ’;
Man和果糖 Fru: ’; Ara: ’; Gal: ’
电泳条件:电压:15KV, 压力进样:15P,30s. 柱温25度｡:硼砂缓冲液75mmol/l : HCL, NaOH, 双蒸水｡
羊栖菜多糖的单糖组成图谱
单糖组分由鼠李糖,木糖,葡萄糖,甘露糖,果糖,阿拉伯糖和三种未知成分组成
谢谢
多糖样品的水解方法
1、酸水解:
现广泛运用,但是用酸解释放出的单糖在不同程度上被酸解破坏,而且糖醛酸阻碍酸解的进行,在此条件下糖醛酸残基仅有一小部分释放出来。另一方面,不饱和的糖醛酸残基被酸解完全破坏,使其不能通过这种程序检测出来。
2、甲醇解:
甲醇解是应用在无水甲醇中加入强酸使多糖分解的方法,其分解比酸解更有效。在甲醇分解过程中释放出的糖醛酸的降解程度也比较小。但是甲醇解对某些多糖的分解所得的糖产率较低。
3、酶解
酶解是一种已经建立起来的检测多糖结构的方法,酶具有选择性和专一性,选择性可以使我们得到想要的糖链,专一性可以确定配糖键的结合位置。对多糖进行分解时要多种酶相混合的酶体系才能对多糖进行有效地水解。