文档介绍：染色体畸变分析(Chromosome Aberration Analysis)
哈尔滨医科大学公共卫生学院
卫生毒理学教研室
任锐
毒理学基础实验课
化学毒物致突变类型?
复习
染色体畸变
染色体数目改变
基因突变
碱基置换
移码突变
转换
颠换
毒理学基础实验课
复习
遗传学终点:
基因突变
染色体畸变
染色体组畸变
DNA原始损伤
Ames实验
微核实验
染色体畸变分析
染色体畸变分析
分子生物学方法
毒理学基础实验课
小鼠骨髓细胞染色体畸变分析试验
毒理学基础实验课
1. 学习动物骨髓细胞标本制作。
2. 了解动物体内染毒及染色体畸变类型。
一、目的
毒理学基础实验课
当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时,称为染色体畸变。具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。因此,应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变,以及畸变的性质和强弱。
二、原理
毒理学基础实验课
三、器材与试剂
见教材。
毒理学基础实验课
动物选择选用18g~24g雄性健康小鼠,每组6~10只。
染毒与取样时间一般染毒一次或多次,多次更为合理。末次染毒后24h处死动物,收获细胞。
剂量最高剂量最大耐受剂量或,1/3~1/8LD50;
最低剂量应为最大给药量或人使用量的50~100倍;
阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺(腹腔注射);
阴性对照给予溶剂。
4. 给药途径原则上采用与人接触受试物相同的途径。
四、实验设计
毒理学基础实验课
1. 注射秋水仙素
2. 骨髓细胞的制备
3. 低渗
4. 固定
5. 制片
6. 干燥
7. 染色
五、操作步骤
毒理学基础实验课
注射秋水仙素
骨髓细胞制备:取股骨,PBS5ml冲洗骨髓细胞,1500r/min,离心10min,弃去上清。
低渗:%氯化钾水溶液5ml,37℃低渗30min,1000r/min,离心10min,弃去上清。
固定:加入3:1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打,静止15min后,以1000r/min离心10min,弃上清。
制片:用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液,从玻片上方3cm~5cm处滴片,每张片子滴2~3滴细胞悬液,使细胞自然分散。
干燥:将制好的片子置空气中自然干燥,并做好标记
染色:Giemsa染色15min
水冲
干燥,阅片
毒理学基础实验课