文档介绍：吉林农业大学
硕士学位论文
大豆贮藏蛋白基因启动子的克隆与功能分析
姓名:张宇
申请学位级别:硕士
专业:生物物理学
指导教师:王丕武;柴晓杰
20070601
大豆贮藏蛋白基因启动予白锣礁与功能分析摘要接,ü旱6物表达载体中应用最广泛的是的所有部位和所有发育阶段都表达,不但造成能源的浪费还会引起植物的形态发生改虻鞍资谴蠖怪肿又兄饕5闹氐鞍祝啥嗷蚣易灞嗦耄裎V挂延衅吒大豆球蛋白基因被克隆、测序,分别是至。大豆种子贮藏蛋白具有种子特异性基因启动子成为了研究高等植物基因特异性表达调控的首选材料。我们以大豆品种“吉蛄校杓埔欢砸铮ü齈扩增得到虻钠舳有蛄小=淇寺到甌上,经大肠杆菌转化后进行蓝自斑筛选,挑取白斑碱裂解法提取质并进行治觥2庑蚪峁砻魉寺〉钠纬の,与预期设计的大小一致,该片段与已发表的虻鞍谆蚱舳有蛄械南嗨菩晕%,但所含的启动子序列所必须的调控元件。融法将重组质粒瓽、质粒分别转化到农杆菌校捎靡杜谭ㄗ目前,基因工程中存在的主要问题之一是外源基因的表达水平、表达部位等问题,因此,作为调控基因表达关键元件之一的启动子的研究便成为基因工程研究的关键。根据启动子的转录模式可将其分为三类:组成型启动子⒆橹匾煨启动子畇和诱导型启动子帧F裎V梗槌尚推舳樱贾峦庠椿蛟谧;蛑参变,影响植物的生长发育。这就使人们越发注重特异表达启动子的研究和应用,特异性启动子指导外源基因定向地在人们预定的时间和空间橹蚱鞴表达,不仅能使目的基因的表达产物在~定空间积累,增加区域表达量,并且使外源基因的表达处于人们的控制之下,既保证了外源基因在植物体内的有效发挥又减少了对植物的不良影响。利用具有特异性表达特性的启动子被认为是实现对目标基因高表达的重要途径,也是培育高效、安全转基因作物的首选。时序表达的功能,在种子成熟的中后期瞬时性的大量合成并贮存于种子蛋白体中。这种种子特异性时序表达的功能主要取决于种子贮藏蛋白基因上游调控序列,所以贮藏蛋白农钡幕蜃镈为模板,根据已发表虻鞍譍腔基因粒,进行觳夂拖拗菩阅谇忻该盖屑ǎê蟮木晁徒淮罅ι锕静庑颍元件的数量和距离上很相似,均具有有典型的盒和盒,以及种子特异表达用该启动子取代植物表达载体的舳樱隚祷虮嗦肭
质粒烟草的根、茎、叶、种子均显蓝色,由此初步得出结论:由该启动子序列引导的的功能。本论文的完成为贮藏蛋白基因表达调控机制的研究提供理论依据,还可以在植化烟草品种。在含有虲抗生素的选择培养基上进行筛选培养,结果获得曜猵瓽基因植株。对曜;蛎缃蠵检测,以未转基因的植株作为阴性对照,结果暝偕缋┰龀鲇肽康钠未笮∫恢碌奶醮6訮检测呈阳性的转基因植株进行杂交检测,杂交结果显示有暧忻飨栽咏恍藕牛得髂康基因已成功整合到烟草基因组中。为了验证所扩增的启动子是否具有种子特异性表达的功能,我们对转瓽、质粒烟草的根、茎、叶、种子分别进行橹Х治觥=峁砻鳎猵质粒烟草的根、茎、叶未显色,而种子显蓝色,表现出明显的种子特异性:而转蚰茉谥肿又斜泶铮谄渌橹形幢泶铮な蹈闷舳泳哂兄肿犹匾煨员泶物的特定部位或发育阶段生产有用蛋白质或其他代谢产物,以实现对外源基因表达的定时、定点、定量三维精确调控。关键词:贮藏蛋白,启动子,转基因烟草,种子特异表达,
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:欲’孚签字罚嘿ぁ年只日学位论文作者签名:弓妖导独创性声明关于论文使用授权的说明签字日期:年∥月,譬日签字日期:年隆蹦本人完全了解吉林农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送位论文的全部或部分内容。本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意吉林农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学,
把大量积累于种子中,具有种子特异性时序表达的功能【俊#氐鞍譵幼右镀诳J大豆贮藏蛋白概述子中含有丰富的蛋白质,其中种子贮藏蛋白含量最为丰富,其他蛋白还包括脲酶、等【。种子贮藏蛋白的主要功能是提供种子萌发时所需的氮源和碳源,而没有催化活性印】。同时大豆种子贮的蛋白体中】,在甈郾0纺旱缬时可分为酸性和碱性两类亚基,电镜研究证明:“鞍子鲅腔拔A礁隽咝蔚脑仓白吹谋庠蔡濉4蠖形式,在甈保鞍卓煞治H鲅腔篴’、畎蚿,它们以,∞’籅