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。祊疘日期:朋/年矽石月匆日昶蝾鋙瓴试驴笙θ:加年口舌其日学位论文版权使用授权说明原创性声明“咝Q宦畚娜氖菘中全文发布·并可按“章程”中规定享受相关权益。旦童诠塞本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有握交后溢卮:口一玺;,口二年;三年发壶。日期:对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人日期:日期:.本人已经认真阅读“咝Q宦畚娜氖菘夥⒉颊鲁獭保饨ū救说难宦畚奶峤导师签名:承担。,一.·.’‘
摘要橡胶树胚性悬浮系及其植株再生体系的建立为橡胶树遗传转化的研究提供了良好的材料。本研究以橡胶树品种热研咝孕∠赴J芴澹芯苛司号ǘ取⒐才养基值及添加乙酰丁香酮浓度、共培养温度、共培养时间及共培养方式对农杆菌介导的橡胶树胚性悬浮细胞遗传转化的影响,优化了转化条件。通过卡那霉素浓度梯度筛选获得了抗性愈伤组织系,并分化得到拟转化胚状体及再生植株。橹旧ā觳狻⒉庑蚍治黾癝咏唤峁砻鳎庠椿蛞丫晒φ辖胂鸾菏骰组小NS心康牡馗牧枷鸾菏餍宰础⒏牧己涂7⑾鸾菏髦种首试础⑻峁┯辛ぞ撸也为基因功能研究提供良好条件。主要结果如下:└司榈嫉南鸾菏髋咝孕∠赴糯;挠跋煲蛩匮芯浚阂訥基因瞬时表达频率和悬浮细胞存活率为指标,采用单因子实验设计对农杆菌菌液浓度、共培养基值、共培养基添加浓度、共培养温度、共培养时间及共培养方式个因素进行研究,确定农杆菌介导的橡胶树胚性悬浮细胞遗传转化的适宜条件为:农杆菌菌液滴.;共培养基值;农杆菌重悬浮和共培养培养基中添加囊阴6∠阃#还才嘌露妫汗才嘌奔~徊捎霉烫骞才嘌方式共培养。剐杂俗橹⑴咦刺寮霸偕仓甑幕竦茫涸谂└司榈嫉南鸾菏髋咝孕∠赴的遗传转化中,农杆菌抑菌选用/奶婵ㄎ髁郑灰钥敲顾刈魑Q≡窨股兀采用从低到高浓度梯度/筛选的方式进行。在该方式下,总共获得个抗性愈伤组织系,个拟转化胚状体,昴庾;偕仓辍肿蛹觳猓壕璆组织化学染色、觳狻⒉庑蚍治龊蚐咏环治觯确定外源基因甀蛞丫晒φ辖胂鸾菏骰蜃镈中。狙芯坎捎门└司榈挤ǔ晒Φ囟韵鸾菏髋咝孕∠赴辛艘糯;醪浇立起了农杆菌介导的橡胶树胚性悬浮细胞遗传转化体系。关键词:橡胶树;根癌农杆菌:胚性细胞悬浮系;遗传转化;植株再生盘
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.外植体脱菌与选择培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。农杆菌介导转化植物悬浮细胞研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..橡胶树遗传转化的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.研究目的与意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.技术路线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯牧虾头椒ā材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..参锊牧稀.└司暧胫柿!组织培养条件和试验所用重要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯.根癌农杆菌介导转化橡胶树胚性细胞悬浮系研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.┡└⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..不同浓度的替卡西林对农杆菌的抑制作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.└司榈甲;鸾菏髋咝孕∠⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
.〖捌渲刈樽由秆农杆菌介导转化橡胶树胚性悬浮细胞影响因素⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.共培养方式对转化效率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.共培养基值对转化效率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.共培养基中附加对转化效率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.共培养温度对转化效率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.共培养时间对转化效率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯橹旧ḿ癋细胞活性测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯橹旧ā赴钚圆舛ā拟转化植株的分子检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.鸾菏饔酌缁蜃镈的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.;⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯