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学位论文作者:⒍学位论文作者:昂日期:麶年‘月学位论文使用授权声明原创性声明日期:幽『『年耭日本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。
靶向基因慢病毒载体构建及对黑色素瘤细胞生物学行为和耐药性影响摘要目的转移的分子开关,有望成为抑制肿瘤转移的重要靶位。技术是目前公博士研究生王琪影师刘林蟠郑州大学第一附属医院整形外科黑色素瘤是体表肿瘤中死亡率最高的恶性肿瘤,其高度侵袭转移性和对于传统化疗药物的耐药性被认为是黑色素瘤治疗和预后的最大障碍。作为肿瘤转移相关因子可通过多种转移相关机制参与肿瘤的侵袭与转移,是控制肿瘤认快速有效的基因沉默方式,有利于进行基因治疗和表达缺失下的功能研究。目前多项研究证实技术可通过调节和关闭基因表达进而调控细胞的各种生命活动,但应用技术靶向基因慢病毒干扰载体的构建、基因沉默对黑色素瘤生物学行为,尤其是侵袭转移能力的影响以及对化疗药物耐药逆转性的研究尚未见报道。本研究拟利用技术,以慢病毒作为基因载体,以人黑色素瘤细胞作为研究对象,以转移相关基因作为靶基因,研究靶向基因慢病毒干扰载体的构建及沉默基因对体外培养细胞生物学行为包括细胞增殖、细胞凋亡、细胞粘附能力、细胞侵袭能力的影响:肿瘤转移相关因子基质金属蛋白酶琈.、┪锏导河南郑州摘要
..《颈泶镌靥澹庑虿⒏腥细胞,进一步应用荧光定量蚖检测对及蛋白表达的沉默效应。,应用荧光定量蚖检测基因沉默后转移相关基因及蛋白表达;应用∈蚁赴窒笛榧觳细胞侵袭能力:应用细胞粘附实验检测对层粘连蛋白和纤维粘连蛋白的粘附能力;应用ḿ觳庀赴鲋常挥τ昧魇较赴羌觳庀赴蛲觯挥τ肕法检测对化疗药物氮烯咪胺耐药性的逆转率。同时应用上述各种方法对对照组相应指标进行检测。统计学处理:,两两比较采用冉匣駾比较。以2钜具有统计学意义。菇ǖ娜詓表达载体分别为疓/猻疓/畇皃/疦.,应用荧光定量步应,甤
检测转染人黑色素瘤细胞后靶基因和蛋白表达水平分别为縊.、.、.、..、..,疓/畇W钣行Ц扇判蛄小晒菇税邢騌膒..《颈泶镌靥澹庑蛑な敌蛄氯罚唤ü菇↖拘..《颈泶镌靥甯腥救撕谏亓鯝赴应用荧光定量蚖检测飋和蛋白的表达水平分别为.,而阴性对照慢病毒组、正常对照组分别为...、《《驹靥甯腥救撕谏亓鯝赴检测基因沉默后转移相关基因和蛋白的表达水平分别为憾跣远哉章《。应用荧光定量蚖检测..毒组甤和蛋白的表达水平分别为.、欢性对照慢病毒组、《:..《咀椤⒄6哉兆槊飨约跎伲异具有统计学意义;《咀榻险6哉兆榍嵛⑾陆担ú钜觳具有统计学意义.=峋ё先旧ǚㄏ赴掣绞笛榻峁允荆..《咀锳赴圆阏沉鞍拖宋沉鞍的粘附能力较慢病毒阴性对照组、正常细胞对照组明显下降,通过酶标仪测定摘要和蛋白正常对照组和蛋白分别为.、.士
结论光密度值,..《咀槎訪虵腛捣直鹞..,较阴性对照慢病毒组、正常对照组明显减少,差异具有统计学意义;阴性对照慢病毒组对和的值分别为...O赴榉直鹞.、.跣对照慢病毒组较正常对照组轻微下降,但差异不具有统计学意义。逋馐笛橹校琈法检测细胞增殖结果显示:,与阴性对照慢病毒组、正常对照组相比较差异无统计学意义.、及时间点时,..病毒组吸光度分别为、和士;而阴性对照慢病毒组、正常对照组吸光度分别为、、和..《咀榈南赴殖较两对照组下降,差异具有统计学意义。:终浓度为痬../、/、痬保《颈泶镌靥辶:弦┪镒橐种坡