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筛选模型的建立学位论文指导答辩委员会
竺竺竺必一竺兰叠兰一鲤一尘学位论文作者虢涵。叩导师粹签字日期≯、阞『日签字日期:州/年‘月/,日学位论文版权使用授权书荩坏嬉胖蹦顾恳嬉9倚椭泵鞯奎拦亘窒蚱渌逃沟难换蛑な槭进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,并同意以下事项:⒀S腥ūA舨⑾蚬矣泄夭棵呕蚧顾徒宦畚牡母从〖痛排蹋市论文被查阅和借阅。⒀?梢越宦畚牡娜ú炕虿糠帜谌荼嗳胗泄厥菘饨屑焖鳎梢采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊馀贪电子杂志社糜诔霭婧捅嗳隒吨泄J蹲试醋芸狻罚授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ
细菌中人工设计反式作用小秆∧P偷慕摘要着研究的进展,近几年来科学家们逐渐发现并认识了生物体内广泛存在的的肿樱捶潜嗦胄,它们的大小一陨聿荒鼙环氤晌5鞍字剩悄芄还惴河跋炝松锾迳节。目前,在真核生物中也已发现了诸如和榷嘀址编码小肿印K孀叛芯康纳钊耄嗣且苍谠松特别是细菌蟹⑾了一种与真核生物小嗨贫确浅8叩腞分子,命名为了反式编码小凰峭ü牍δ芑蚧ゲ古涠砸越档桶谢虻姆胨平,并影响其稳定性。扇际跻丫⒄钩晌U婧松镏醒芯勘达调控的主要手段。迄今为止,同源重组,基因敲除等技术仍然是研究原核生物中基因表达的主要工具。所以在原核生物中建立一种类似于的基因沉默技术具有广泛的发展空问。在前期的研究中,我们利用生物信息学的相关软件,分析了一些细菌内源反式作用小囊患禷级结构,首次提出了细菌中反式作用非编码小的设计原则。根据这个原则,我们分别针对大肠杆菌的内源和外源基因设计了一系列,将它们转入宿主细胞后,通过检测目标基因的表达水平,我们发现了大部分能够不同程度的沉默靶基因的表达,其中最高的干扰效率可达%左右。我们建立了在细菌中研究基因功能的一种新方法。为了进一步实现上述新方法的应用,如何实现对于针对某种靶基因的一系列的筛选,方便而直观的将干扰效率高的鉴别出来,我们进行了新的研究。我们在大肠杆菌中构建了双质粒筛选模型,选择了和两个内源基因作为靶基因,根据提出的设计原则,分别设计了蚏系列的,,其中最高者达到了%左右。通过以上实验我们得到了人工设计反式非编码小诟锢际弦跣跃幕因沉默中起到了明显的作用,为了探讨该设计原则能否设用于革兰氏阳性菌中,我们又针对金黄色葡萄球菌的毒力基因设计了一系列,但是没有发现它—
有较好的应用前景,可以为细菌感染的治疗做出新的贡献。关键词:人工设计反式作用换虺聊簧秆∧P停槐ǜ婊颍籋;们对靶基因有明显的抑制效果。综上所述,我们建立了一种实现筛选的一种快速有效的方法,通过双质粒筛选模型,简单直观的比较不同的干扰效率,并且通过报告基因活性的测定,间接的反映一些表现性不易检测的靶基因的表达水平。筛选模型的建立是细菌中反式作用非编码小杓圃虻闹匾@┱购陀τ茫
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