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纸电泳
醋酸纤维薄膜电泳
聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE)
(可分为圆盘电泳和垂直平板电泳)
琼脂糖凝胶电泳
SDS-聚丙烯酰***凝胶电泳
等电聚焦(IEF)
双向电泳
蛋白质的纯化方法
聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE)是利用聚丙烯酰***凝胶作为支持物的电泳法,聚丙烯酰***凝胶是由单体丙稀酰***和交联剂甲叉双丙稀酰***交联而成的多孔网状凝胶。
不连续PAGE有分离胶、浓缩胶和样品胶。
PAGE分辨率很高。
电泳法
聚丙烯酰***凝胶电泳法
电影
电泳过程
蛋白质的纯化方法
SDS(十二烷基磺酸钠)是一种阴离子型表面活性剂,它能够与蛋白质多肽链中的氨基酸残基按大约1。
每一个蛋白质分子都因为结合了许多的SDS而带有大量的负电荷,而蛋白质分子原有的电荷则可以忽略。该法主要利用了蛋白质分子量大小不同而分离蛋白质。
用已知分子量的蛋白质作为标准,则可以估算出不同蛋白质的分子量。
电泳法
SDS-聚丙烯酰***凝胶电泳法
蛋白质的纯化方法
将***电解质(eg:pH3-9,pH5-7)同蛋白质样品一起加入到已经灌好的凝胶中,在电场下,***电解质首先达到它的等电点而平衡,蛋白质样品根据它自身的等电点分别向两极移动,最后也达到平衡。
等电聚焦:这种按等电点的大小,生物分子在pH梯度的某一相应位置上进行聚焦的行为称等电聚焦。
电泳法
等电聚焦
等电聚焦的特点就在于它利用了一种称为***电解质载体的物质在电场中构成连续的pH梯度,使蛋白质或其他具有***电解质性质的样品进行聚焦,从而达到分离、测定和鉴定的目的。
蛋白质双向电泳
银染结果
考马斯亮染色为蓝色
连续电泳
几种常用的层析法
吸附层析
分配层析
离子交换层析
凝胶过滤层析
亲和层析
柱层析
蛋白质的纯化方法
此法是利用离子交换树脂作为柱层析支持物,将带有不同电荷的蛋白质进行分离的方法。
离子交换树脂可以分为阳离子交换纤维素,如羧***纤维素(CM纤维素)等,阴离子交换纤维素,如二乙基氨基乙基纤维素(DEAE纤维素)等。
带正电荷多的蛋白质与纤维素结合较强,而带正电荷少的蛋白质与纤维素结合则较弱。用不同浓度的阳离子洗脱液,如NaCl溶液进行梯度洗脱,通过Na+的离子交换作用,可以将带有不同正电荷的蛋白质进行分离。
层析法
离子交换层析法