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集卷第期林业科学研究...
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杉木悬浮细胞系的建立
和原生质体的分离
诸葛强阀国宁
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中国林业科学研究院亚热带林业研究所
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/ 的培养基上诱导愈伤组织,通过筛选继代培养,得到了生长旺盛、质地松散的愈伤
组织细胞系。继代初期适当降低蔗糖浓度有助于减少愈伤组筝的褐化。将十月龄的愈伤组织转
移至含.~./,一、.~ ./、/ 的液体培养基振荡培
养, 建立了增殖快、分散性良好柏杉木悬浮细胞系。从十月龄的悬浮细胞酶解纤维素醇、
. 果胶酶和甘露醇,游离得到大量的杉术原生质体, 产量为.×十/ ,活力
达到上。
美葡,术悬浮细胞系原生质体的
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运用植物悬浮细胞系和原生质体是生物技术中进行突变系筛选以及植物基因转移,细胞
杂交等项研究较理想的手段, 同时对于生理学、生物化学,细胞学、遗传学、分子生物学
等研究亦是良好的实验系统。与草本植物相比, 林木有关细胞悬浮培养及原生质体培养等
方面的研究起步晚、基础弱。其中难度较大的针叶树种的研究进展更为缓慢。近些年来,
等对白云杉,等【~对火炬松以及其它数十种针叶树种如花旗松、落
叶松等进行了研究, 取得了许多重要的进展。
杉木是我国南方重要的速生用材针叶树种之一,但就细胞培养和原生质体分离及培养等
研究方面目前尚未见报道。
伤组织,筛选继代培养,进而建立悬浮细胞系,并经酶解,分离出有活力的原生质体。旨在期
望借助于细胞培养及原生质体培养技术,为杉木的遗传改良、基因导入及细胞融合等研究提
供实验基础。
材料和方法
. 愈伤组织的诱导
杉木成熟种子采自贵州锦屏吸涨后剥去种皮,先后用%酒精溶液抉浸,. 氯
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丰奉研究为中国林科院厦亚热带林业研究所科研基金资助项目。车文置僦重蓐部分耨到车所赴请芬同击的大力帮助’
特此系谢.
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期诸葛强等:杉木悬浮细胞系的建立和原生质体的分离
化汞:溶液约~ 灭菌, 无菌水冲洗~ 次。分别切取子叶、下胚轴等接种
于愈伤组织诱导培养基表中,置于± ℃下暗培养。约个月后, 切口周缘出现愈伤
组织,选取淡黄色质地松散的愈伤组织,进行继代培养,约每月次。继代初期,培养基均
采用愈伤组织诱导培养基。第次继代培养时,将挑选的愈伤组织转移至含./,一
、./、/、蔗糖的培养基上。
. 鼍浮细胞系的立
将经过次继代培养、约个月龄、生长旺盛的淡黄色愈伤组织约转移至含液体
培养基的三角瓶中液体培养基的成份与上述的愈伤组织继代培养基相同。而后置于
约的摇床上,在± ℃黑暗下进行振荡培养。~ 继代次。悬浮细胞生长率
采用细胞千重法进行测定】。即悬浮液经双层尼龙网过滤后烘干℃, 、称重。
. 厦生质体的分离
取经自然沉降后弃去上清液、继代后第的悬浮细胞约个月龄约, 加入等
体积的酶液。酶液组成是纤维素酶、. 果胶酶
, ·, 、·、甘露醇、
,.。酶液用. 滤膜过滤灭菌。酶解物置于摇床上,±
℃。酶解液先后用和的尼龙网过滤,除去大细胞
团。酶