文档介绍：第卷第期江苏大学学报医学版. .
年月
人原代肥大细胞体外诱导和组织分离方法的建立
翟荣荣, ,蒋金凤,张济,丁永斌。,王建华,魏继福
.南京医科大学第一附属医院药学部研究室,江苏南京;.中国科学院上海巴斯德研究所病毒免疫学实验室,上海
;.南京医科大学第一附属医院普外科,江苏南京
摘要目的:建立获取和培养人原代肥大细胞的方法,为探讨肥大细胞的免疫调节作用及其机制奠定基础。方
法:用重组人源干细胞因子、一和一刺激造血干细胞使之分化成肥大细胞;密度梯度离心结合免
疫磁珠分选法,分离肠道黏膜肥大细胞。应用免疫荧光染色技术分析所获得的原代肥大细胞表面分子和
,甲苯胺蓝染色或间接免疫荧光染色检测胞内类胰蛋白酶含量。结果:黏膜肥大细胞及造血干细胞刺
激分化而来的肥大细胞均表达和,胞内均含有类胰蛋白酶。结论:这两种方法均可以有效地获得大量纯
化的原代肥大细胞,且各有优势,所得细胞适用于肥大细胞在机体免疫调节和病原防御等生理功能的后续研究。
关键词肥大细胞;肠道黏膜;类胰蛋白酶;诱导
中图分类号. 文献标志码文章编号———

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肥大细胞是定位于组织的一类胞质内富含嗜碱肥大细胞。.与机体生理条件下肥大细胞的
性颗粒的细胞¨,与哮喘、变态反应等疾病的发生差异,限制了对肥大细胞功能的深人研究。鉴于此,
密切相关。近年来,肥大细胞在调节机体免疫、防御我们建立了两种人原代肥大细胞的体外诱导培养和
病原微生物人侵等方面的作用正在引起人们的关分离方法,两法均可获得纯度较高、状态良好的肥大
注。目前主要采用一,一种从肥大细胞淋巴瘤细胞,可适用于肥大细胞在免疫调节和病原防御中
患者中分离转化的细胞系研究作用的后续研究。
作者简介翟荣荣一,女,安徽肥西人,检验师,硕士研究生,主要从事肥大细胞与病原微生物相互作用的研究;魏继福通讯作
者,教授,硕士生导师,:.
: 翟荣荣和蒋金凤为并立第一作者
第期翟荣荣,
剪成小块,放人含//
材料和方法
一巯基乙醇的液,℃,/磁力搅拌
. 材料,洗涤次,再放入含/ 的—
.. 细胞和组织健康人外周血单个核细胞. 液,℃,/磁力搅拌,洗涤次,
,购于上海市然后转入含%、/青霉素和/
血液中心;直肠和或结肠组织由南京医科大学第一链霉素的溶液,℃,/磁力搅
附属医院普外科提供。患者签署知情同意书,并获得拌,平衡组织中和¨ ;接着将组织剪
南京医科大学第一附属医院伦理委员会批准。成,加入含% 、/胶原酶.
.. 主要试剂和抗体一巯基乙醇和/、/透明质酸酶./和
培养基公司,胶原蛋白水解酶型和/脱氧核糖核酸酶./的一
甲苯胺蓝公司,透明质酸酶公培养基中消化组织次,将收集的单细胞悬液
司,脱氧核糖核酸酶型公司,
混合,过目尼龙网,离心,
分离液公司,抗抗体包被的磁
/.溶液重悬细胞,细胞密度保持在
珠、抗抗体包被的磁珠和细胞分选缓
/左右。
冲