文档介绍：分子生物学实验
课件作者:蒋华云
琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA
实验目的
学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术
检测上次实验课提取的质粒DNA
实验原理
电泳
带电物质在电场中的趋向运动称为电泳。凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点,已成为蛋白质、核酸研究的首选标准方法。
泳动率
泳动率是带电颗粒在一定的电场强度下,单位时间内在介质中的迁移距离。
影响泳动率的因素
样品的物理性状(分子大小、电荷多少、颗粒形状和空间构型)
支持物介质(琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶)
电场强度
缓冲液离子强度(~)
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动的电荷效应和分子筛效应
DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动
在一定的电场强度下, DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即DNA分子本身的大小和构型
质粒DNA分子的3种构型
超螺旋的共价闭合环状质粒DNA(covalently closed circular DNA,DNA)
开环质粒DNA,即共价闭合环状质粒DNA一条链断裂(open circular DNA,简称OCDNA)
线状质粒DNA,即共价闭合环状质粒DNA二条链断裂(linear DNA,简称L DNA)
实验仪器
分析天平
微波炉
移液器(10uL)
琼脂糖凝胶电泳系统(水平槽)
紫外线透射仪(或凝胶成像系统)
琼脂糖凝胶电泳系统(水平槽)
水平槽电泳系统的使用
缓冲液
染料指示剂
琼脂糖凝胶
电泳仪