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人参为五加科植物人参(.)的干燥根,是传统名贵中药,始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其种植者称为“园参”,野生者称为“山参”。人参拥有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能,用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力弱竭、心源性休克等的治疗。
人参的化学成分很复杂,有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经
现代医学和药理研究证明,人参皂苷为人参的主要有效成分,它拥有
人参的主要生理活性。人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人
参皂苷(ginsenosides)。到当前为止,文件报导从人参根及其余部位已
分别确立化学构造的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2、-Rb1、-Rb2、
-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3等
余种人参皂苷。
依据皂苷元的构造可分为A、B、C三种种类:①人参二醇型-A
型,②人参三醇型-B型,③齐墩果酸型-C型。A型和B型皂苷均属
四环三萜皂苷,其皂苷元为达马烷型四环三萜,A型皂甙元称为20(S)-
原人参二醇[20(S)-protopanaxadiol]。B型皂甙元称为20(S)-原人参
三醇[20(S)-protopanaxatriol]。C型皂苷则是齐墩果烷型五环三萜的
衍生物,其皂苷元是齐墩果酸(oleanolicacid)。
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[目的要求]
经过实验进一步掌握三萜类化合物的理化性质及提取、分别和检识方法。
学****和掌握简单回流提取法、两相溶剂萃取法、旋转蒸发器、大孔树脂柱色谱等基本实验操作技术。
[实验原理]
人参的主要成分为人参皂苷,总皂苷含量约4%,人参皂苷大
多半是白色无定形粉末或无色结晶,味微甘苦,拥有吸湿性。人参皂
苷易溶于水,甲醇、乙醇,可溶于正丁醇、乙酸、乙酸乙酯,不溶于
***、苯等亲脂性有机溶剂。水溶液经振摇后可产生大批的泡沫。人
参总皂苷无溶血作用,分别后,B型和c型人参皂苷有明显的溶血作用,而A型人参皂苷有抗溶血作用。
人参中除含有皂苷外,还含有脂溶性成分如挥发油,脂肪、甾体
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化合物及大批的糖类等,这些类成分对人参皂苷的分别和精制有扰乱,因此一定除掉,方可获得纯度较高的皂苷。
本实验以人参根为原料提取分别人参总皂苷,利用人参总皂苷易溶于甲醇,不溶于***性质采纳溶剂法进行初步提取去杂;而后依据皂苷在含水丁醇中有较好的溶解度的性质采纳萃取法进行分别;再用积淀法或大孔吸附树脂法进前进一步分别精制;对提出的总皂苷采纳检测三萜类化合物通性的理化检识方法——泡沫试验及显色反响进
行初步定性检识;最后依据人参总皂苷中各单体皂苷分子构造中糖基个数和羟基数不一样而极性大小不一样的性质,经过薄层色谱法对人参总皂苷进一步分别和专属定性检识。
[实验内容]
一、人参总皂苷的提取分别
任选一种方案
方案(1)
人参根粗粉(60目10g)
用滤纸筒包好,置索氏提取器中,
加甲醇加热回流提取至三***化锑***仿饱和溶液反响呈阴性,
提取液
减压回收甲醇
浸膏
10倍量蒸馏水溶解
水溶液
用***在分液漏斗中,振摇脱脂4次
***液(脂类)水层
用水饱和的正丁醇萃取6次,
归并
正丁醇液
减压回收正丁醇,蒸干
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残留物(总皂苷粗品)
方案(2)
人参根粗粉(60目10g)
用滤纸筒包好,置索氏提取器中,
加10倍量***回流脱脂至无色,
***液(脂类)残渣
加甲醇加热回流提取至三***化锑***仿饱和溶液反响呈阴性甲醇提取液
减压回收甲醇
浸膏
用10倍量蒸馏水溶解
水溶液
用水饱和的正丁醇萃取6次,归并
正丁醇液
减压回收正丁醇,蒸干
残留物(总皂苷粗品)
二、人参总皂苷的分别精制
将人参总皂苷粗品分为两份
方法(1)积淀法
份总皂苷粗品
甲醇溶解,倾入约10倍量***,
不停搅拌,析出
黄白色积淀母液
过滤回收溶剂,用少许甲醇溶解,再倾入约10倍量***
总皂苷黄白色积淀
过滤
总皂苷
归并,减压60℃下真空干燥,称重计算收率
精制总皂苷
方法(2)大孔树脂柱色谱法
大孔树脂色谱是最近几年来用于分别和富集天然化合物的一种常用
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方法,应用大孔树脂分别皂苷,主要用于皂苷的富集和初步分别。将
含有皂苷的水溶液经过大孔树脂柱吸附后,先用水洗脱除掉糖和其余
水溶性杂质,而后改用不一样浓度的甲醇或乙醇进行梯度洗脱。极性大的皂苷可被低浓度的甲醇或乙醇洗脱下来,极性小的皂苷则被高浓度的甲醇或乙醇洗脱下来。
份总皂苷粗品
用少许水溶解,加样于办理好的D101型大孔树脂柱上,吸附1小时后,用3倍柱体积蒸馏水洗脱除杂质
继用60%乙醇洗脱至三***化锑***仿饱和溶液反响呈阴性
洗脱液
减压回收溶剂
残留物
减压60℃下真空干燥,称重计算收率
精制总皂苷
三、人参皂苷的判定
(一)理化检识
取人参根粗粉1g,加水浸泡(1:10)1小时或置80℃水浴上温浸30分钟,过滤得滤液供以下试验。
取供试液2ml于试管中,紧塞试管口后猛力振摇,试管内液体则产生大批的长久性的似蜂窝状泡沫(示有皂苷)。
注:含蛋白质和黏液质的水溶液虽也能产生泡沫,但不长久,搁置很快消逝。
显色反响
1)醋酐-浓硫酸反响(Liebermann-Burchard反响)
取样品适当,,,再
于溶液的边缘滴加1滴浓硫酸,察看并记录现象。
2)三***甲烷-浓硫酸反响(Salkowski反响)
取样品适当,加三***甲烷1ml使溶解,沿试管壁加等量的浓硫酸,
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分别置可见光及紫外灯下,察看并记录现象。
3)五***化锑反响(Kahlenbergreaction)
取样品适当,加五***化锑的***仿溶液反响呈紫色。或将样品的***
仿或醇溶液点于滤纸上,喷20%五***化锑的***仿溶液(或不含乙醇和
水的三***化锑饱和的***仿溶液),干燥后60℃~70℃加热,显色,察看
并记录现象。
(二)色谱检识
薄层色谱
吸附剂:硅胶-CMC薄层板
样品溶液:称取由积淀法及大孔吸附树脂法制得的精制总皂苷各一份,加甲醇制成
1ml含2mg的样品溶液。
比较品溶液:称取人参皂苷Rb1、Re、Rg1比较品,加甲醇制
成1ml含2mg的比较品混淆溶液。
比较药材溶液:取人参比较药材粉末1g,加***仿40ml,置水
浴上回流1小时,弃去***仿液,药渣挥干残余溶剂,
润湿后,加水饱和的正丁醇10ml,超声办理30分钟,汲取上清液,
加氨试液三倍量,摇匀,搁置分层,取上层液蒸干加甲醇溶解,使成
1ml,作为比较药材溶液。
睁开剂:
***仿-甲醇-水(65:35:10)10℃以下搁置后的基层溶
;
***仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下搁置后的基层溶液;
显色剂:10%硫酸乙醇溶液
显色方式:10%硫酸乙醇溶液喷雾后,105℃加热至斑点显色
清楚。分别置日光及紫外灯(365nm)下检视.
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[实验说明及注意事项]
,注意振摇不可以过分强烈,以防产生乳化现象。
,因含皂苷易
产生大批泡沫发生倒吸现象。故应注意察看随时调整水浴温度及旋转
蒸发器转速,防止事故的发生。
,水浴温度不宜过高,应与溶剂沸点相适应。别的可加速冷凝水的流速,以增添冷凝成效。
***的蒸馏操作,不用另换蒸馏装置。只将索氏提取器
中的滤纸筒拿出,再照原样装好,持续加热回收烧瓶中的溶剂,待溶
剂液面增添至高虹吸管顶部曲折处1cm处,暂停回收,取下提取器,
将此中***移置此外容器中,这样频频操作,即可达成回收***的操
作。
,欲检查有效成分能否提取完整,可取提
取器中提取液数滴,滴于白瓷皿中,挥散溶剂,察看有无残留物,或
滴于滤纸片上,而后进行醋酐-浓硫酸反响或三***化锑***仿饱和溶液
反响。若反响呈阴性,示已提尽。
,加乙醇浸泡24h后,再用乙醇洗脱至流出液与3倍水混淆后不呈浑浊,持续用蒸馏水洗至无醇为止备用。
[思虑题]
?怎样与甾体皂苷差别?
,并说明提取、分别原理。
***作提取溶剂时,操作中应注意哪些事项?
附:[实验预****要求]
,明的确验原理。
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、试药,仪器及装置。明
的确验需要试剂及仪器,掌握提取装置原理、构成及安装)。
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