HPV常用检测方法的问题与分析.ppt

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感染组织中HPV蛋白的检测
针对HPV抗原,主要是衣壳蛋白制备抗体,通过免疫学方法进行检测。ELISA,免疫沉淀法等。
优点与问题
优点:原理明确,操作相对简单
缺点:由于HPV至今尚不能在体外培养,且其免疫原性较弱,故血清学方法检测灵敏度较低。
HPV感染的血清学检查
检测人体血清中是否存在有针对HPV产生的抗体,通过免疫学方法进行检测。
优点与问题
优点:原理明确,操作相对简单
缺点:血清学检测的对象是抗原和抗体,由于人体对HPV产生免疫应答有一定的迟滞性,所以血清学检测对无免疫应答者和HPV潜伏期感染者会产生漏检。
HPV基因组检测
PCR类检测方法
Southern杂交法
原位杂交
杂交捕获法
PCR类检测方法
优点:该方法灵敏度高,
缺点:是容易发生样品间的交叉污染,从而导致假阳性率高。另外利用该方法进行HPV分型操作比较烦琐。
Southern杂交法
优点:该方法灵敏度及特异性均高,适
用于HPV分型、HPV-DNA分子质量鉴定、基因组酶切图谱建立及物理状态研究等。缺点:其操作麻烦、耗时、费用高,且必须应用新鲜组织标本,故不宜大规模临床使用。
原位杂交
该法利用HPV探针与组织中的HPV-DNA杂交,首先将探针和组织中的双链HPV-DNA变性为单链,然后使探针与组织杂交.
优点:利于病理学分析
缺点:杂交链的稳定性不高,在杂交过程中,部分探针单链复性,使杂交率降低,影响HPV-DNA的检出率。
杂交捕获法
杂交捕获(hybridcapturesystem,HCS)实验是美国Digene公司新发展的一种检测HPVDNA的技术,其原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测。
基本实验步骤如下:
;
-DNA杂交体;
-DNA杂交体固定在试管壁或微孔壁上;
-DNA杂交体结合,使信号放大;
,判读光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNA-DNA杂交体的含量。