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思考1分离生物大分子的基本思路是什么?
选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。
思考2蛋白质的分离和提取的原理是什么?
根据蛋白质各种特性的差异,如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等,可以用来分离不同蛋白质。
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思考3高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质
的何种作用,作用结果是什么被破坏?
变性、变性、空间结构
思考4人们用鸡的红细胞提取DNA,用人
的红细胞提取血红蛋白的原因是什么?
鸡的红细胞具有细胞核,含有DNA,便于进行DNA的提取,人的红细胞无细胞核,结构简单,血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。
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一、基础知识:
㈠凝胶色谱法(分配色谱法):
1、凝胶:
一些微小多孔的球体(内含许多贯穿的通道,由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖,具多孔的凝胶就叫分子筛)
2、概念:根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小,利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,来进行分离。
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3、原理:当不同的蛋白质通过凝胶时,相对()的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程(),移动速度(),而()的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在()移动,路程(),移动速度(),相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
相对分子质量较小
较长
较慢
相对分子质量较大
凝胶外部
较短
较快
大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙,路程短,流动快
小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部,路程长,流动慢
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洗脱:从色谱柱上端不断注入缓冲液,
促使蛋白质分子的差速流动。
混合物
上柱
洗
脱
大分子流动快
小分子流动慢
收集
大分子
收集
小分子
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1、概念:在一定的范围内,能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用,具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。
㈡缓冲溶液:
2、作用:
能够抵制()的对溶液的()的影响,维持PH基本不变。
外界的酸或碱
PH值
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3、缓冲溶液的配制
通常由()种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的()就可以制得()使用的缓冲液。
1-2
使用比例
在不同PH范围内
思考:说出人体血液中缓冲对。
NaH2PO4/Na2HPO4
H2CO3/NaHCO3
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