文档介绍：第一篇免疫学
实验一凝集反应
颗粒性抗原(如完整的细菌和细胞)与相应抗体结合,在一定
条件下可发生肉眼可见的凝集现象,称为凝集反应(
。凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应两种。本实
验介绍凝集反应的原理、基本类型及其用途,要求学生熟悉玻片凝
集、试管凝集的实验方法和结果分析。
一、直接凝集反应
直接凝集反应是指颗粒性抗原与相应抗体在体外直接结合而
出现凝集的反应。直接凝集反应又可分为:玻片凝集和试管凝集。
(一)玻片凝集试验(人血型鉴定)
指用已知抗体与未知颗粒性抗原在玻片上直接结合而出现的
凝集反应。可用于细菌的鉴定、分型及血型鉴定等。
【原理】
人类血型抗原有两种: 抗原和抗原。型血红细胞
表面有抗原, 型血红细胞上有抗原, 型血红细胞上有
两种抗原, 型血红细胞上则无这两种抗原。若分别将抗
抗血清与待检红细胞混合,抗和( 或)抗血清与红细胞上的
相应抗原结合可引起红细胞凝集,据凝集状况便可判定出受试者
的血型。
【材料】
)标准抗血清、抗血清。
玻片、无菌三棱采血针、无菌牙签、吸管、酒精棉球等。
【方法】
取洁净载玻片一张,用特种铅笔分为两格,并注明
字样。
用一支吸管吸取抗血清一滴,加在格内;用另一支
吸管吸取抗血清一滴,加在格内。
)用酒精棉球消毒无名指指尖或耳垂,待酒精干后用无菌
采血针刺破表皮,用吸管取血滴,加入含生理盐水的试
管中迅速与生理盐水混匀(约为红细胞悬液)。再立即用无菌
干棉球压迫止血。
)另取巴氏吸管吸取上述待测红细胞悬液,于格、
格内各加一滴,然后分别用牙签将抗血清与红细胞悬液搅拌均匀,
以加速其凝集。
将玻片静置于实验台上数分钟后在白色背景下观察凝
集情况。
【结果】
如果混合液由红色均匀混浊逐渐变为透明,并出现大小不等
的红色凝集块者,即为红细胞凝集;若混合液仍呈均匀混浊,则表
明红细胞未发生凝集。血型判定参照表
表血型鉴定试验结果与判定
表示凝集; 表示无凝集。
【注意事项】
载玻片务必标明
所用抗血清必须是在有效期内。取两种抗血清的吸管不
可混用。
混匀抗血清与红细胞时,牙签不可混用。
及时观察结果,以免干涸。
(二)试管凝集试验
【原理】
用已知的定量抗原悬液与系列稀释的待检血清在试管内混
合,经一定时间静置保温后,观察各管凝集程度。常用于定量测定
血清中的抗体水平。
【材料】
)伤寒菌液( 亿个/
) 伤寒“”免疫血清。
【方法】
取试管支,标记好试管顺序。
)于第管内加生理盐水,其余各管加生理盐水
。
)取伤寒“”免疫血清加入第管吹吸三次混匀
后,取出加入第管,同样吹吸三次混匀后,取出加
入第管,如此稀释至第管,由第管中取出弃之,第
管不加血清,作阳性对照,见表。至此,第管中的血清稀
:
释度依次为。
表试管凝集加样顺序( 单位:
各管加入伤寒菌液各这时血清稀释度加倍)。
摇震试管架混匀管内液体,置保温或保
温,观察结果。
【结果】
对照管(第管):上清液混浊,管底可有沉淀的细菌,如
斜置试管可见其流动,若轻轻振摇便分散呈均匀混浊状。应首先观
察对照管。
试验管:按管依次观察。阳性者管底有不规则状凝
集物,较松散,若轻微振摇试管即可悬浮起来。阴性者与对照管相
同。
凝集程度的判别与记录:
:液体澄清透明,细菌全部凝集于管底,轻轻摇动可见
大的凝集块。
:液体稍混,细菌大多数凝集于管底,摇动后凝块较前
者小。
:液体中等混浊,液体中有明显的凝集物,凝集块较小。
:液体混浊,仔细观察可以看到液体中有很小的凝集
块。
:与对照管相同。
判定凝集效价:出现明显可见凝集物( )时的血清最高
稀释度为血清效价。
【注意事项】
严格控制反应温度,温度在之间时,升高温度可
以加快反应速度,但温度过高,易导致抗体破坏。
控制值在之间,若可引起非特异性酸凝
集。
保持一定电解质浓度,否则不易出现凝集。
)观察结果前,不要振摇试管。观察时应与对照管同时对比
后再判断。
二、间接凝集反应
间接凝集反应是将可溶性抗原(或抗体)先吸附(或偶联)在与
免疫无关、有一定大小的颗粒性物质(载体)上,然后再与相应抗体
(或抗原)反应而出现的凝集反应。常用作载体的物质有红细胞、聚
苯乙烯乳胶颗粒、金黄色葡萄球菌蛋白)等。根据载体的不
同,分别有不同的名称,如血凝试验、胶乳凝集试验、协同凝集试验
等。
胶乳凝集抑制试验
【原理】
抗原致敏的胶乳颗粒遇相应抗体结合而发生凝集。